HA-CS-TGF-β1復(fù)合材料對(duì)糖尿病兔種植體周?chē)鶵unx-2-ALP-OC基因的影響.pdf

1、目的：通過(guò)將羥基磷灰石（HA）、殼聚糖（CS）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）三種材料制作成種植體表面的復(fù)合涂層，再把種植體植入于糖尿病兔的脛骨進(jìn)行觀察，以便探討其周?chē)?Runx-2/ALP（堿性磷酸酶）/OC（骨鈣素）基因表達(dá)的改變，從分子水平評(píng)估該種植體的成骨性，減少口腔種植手術(shù)進(jìn)行過(guò)程中和手術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，提高種植手術(shù)的成功率。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)將純鈦種植體進(jìn)行表面微弧氧化處理后制備明膠微球和HA/CS涂層并進(jìn)行交聯(lián)獲

2、得改性種植體，在掃描電鏡(SEM)的微觀狀態(tài)下，觀察改性后的種植體微孔的蛋白粘附情況，并對(duì)改性種植體的表面形貌進(jìn)行分析。從西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心挑選兔齡相同的新西蘭長(zhǎng)耳兔30只，隨機(jī)選取其中的18只兔，對(duì)其進(jìn)行耳緣靜注四氧嘧啶（Alloxan），以便獲得SPF級(jí)的2型糖尿病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，取其中高血糖穩(wěn)定的兔12只，和剩下的正常血糖兔12只，共24只兔，分別在兔脛骨干骺端植入種植體，術(shù)后并密切監(jiān)測(cè)糖尿病兔，給予所有模型進(jìn)行抗炎抗感染治療。分

3、別在進(jìn)行種植植入手術(shù)后的4、8、12周取出兔脛骨上的含有種植體及周?chē)墙M織的樣本，待所有樣本收集齊后分別提取其RNA，采用實(shí)時(shí)定量 RT-PCR法分別檢測(cè)普通兔和糖尿病兔在不同時(shí)期、不同種植體植入后AGEs（晚期糖基化終末產(chǎn)物）、Runx-2、ALP、OC的表達(dá)量，收集相應(yīng)數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)并繪制相應(yīng)各組基因的擴(kuò)增曲線和溶解曲線圖和基因表達(dá)量隨著時(shí)間變化的柱狀圖，比較實(shí)驗(yàn)各組的差異。
　　結(jié)果：由掃描電子顯微鏡（SEM）分別掃描微弧氧化后

4、種植體和加載蛋白后改性種植體表面，可見(jiàn)微弧氧化種植體表面可見(jiàn)大量微孔。改性后的種植體表面存在大量加載TGF-β1蛋白的明膠微球，明膠微球的表面可見(jiàn)蛋白吸附，測(cè)得該明膠微球球徑為8～30μm。
　　在建模過(guò)程中2只兔行耳緣靜脈注射后死亡，1只兔術(shù)傷口感染后血糖恢復(fù)正常，其余15只兔建模成功。建模后，模型組新西蘭兔空腹血糖由5.93±0.66mmol/L增高到（18.61±4.87)mmol/L，穩(wěn)定于13.8mmol/L以上，而對(duì)照

5、組普通兔的血糖為6.12±0.62mmol/L（p<0.05）。
　　使用改性種植體的實(shí)驗(yàn)組，Runx-2、ALP、OC的mRNA表達(dá)在同一時(shí)間點(diǎn)上高于普通種植體組（P＜0.05），正常兔子改性種植體基因表達(dá)最高，糖尿病兔改性種植體率與正常兔子正常種植體的基因表達(dá)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，糖尿病兔植入了正常種植體的基因表達(dá)量是最低的。而隨著時(shí)間的增加，使用改性種植體的Runx-2、ALP、OC的基因表達(dá)量增加高于普通種植體（P＜0.05）。

6、AGEs的表達(dá)在普通兔子上，使用普通種植體隨時(shí)間遞增比改性種植體較快（P＜0.05），而在糖尿病兔上，使用改性種植體后，AGEs遞減較快，普通種植體不變。
　　結(jié)論：
　　1.將純鈦種植體進(jìn)行表面微弧氧化處理后制備明膠微球和HA/CS涂層并進(jìn)行交聯(lián)獲得改性種植體，這種方法可以穩(wěn)定將裝有圓球型的 TGF-β1蛋白明膠微球穩(wěn)定粘附在種植體上。
　　2.通過(guò)新西蘭長(zhǎng)耳兔按照0.1g/kg藥物體重比例進(jìn)行耳緣靜脈注射5％濃度的