ID1與非小細胞肺癌相關(guān)關(guān)系的研究.pdf

1、背景：
　　肺癌是當(dāng)今世界上發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，這到2030年都不會改變。肺癌的整體5年生存率只有15％。隨著世界整體環(huán)境的污染，肺癌發(fā)病率呈逐年遞增趨勢，嚴重威脅著人們的生命。每年有1500萬人被新診斷出患有肺癌，其中80%到85%為非小細胞肺癌（NSCLC）包括肺鱗癌、肺腺癌以及大細胞癌等。由于肺癌早期無明顯癥狀，發(fā)病隱匿，大部分肺癌患者初步診斷時已屬晚期，即多已發(fā)生肺內(nèi)或者遠處轉(zhuǎn)移，而喪失手術(shù)機會，大大降低了患

2、者的5年生存率，只有30%的患者適合手術(shù),且即便是IA期患者仍會出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。對于中晚期患者，化療和放療是主要的治療手段。而傳統(tǒng)放化療療效不理想，有效率僅有30%-40%，且副作用較多，已經(jīng)達到了平臺期。靶向藥物是近年來應(yīng)用于臨床肺癌患者的新的藥物，目前臨床應(yīng)用較多且最成熟的是第一代表皮生長因子酪氨酸激酶抑制劑EGFR-TKIs(吉非替尼、厄羅替尼等)，其整體有效率為30%-40%，PFS時間為12個月。如何延長PFS時間，即探索

3、新的耐藥機制，克服靶向藥耐藥，是我們所面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。因此，尋找一種新的與肺癌耐藥相關(guān)的預(yù)后因子勢在必行。
　　ID蛋白,又稱為DNA結(jié)合/分化抑制因子(Inhibitor of DNA binding/differentiation),從屬于bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族，包括ID1, ID2, ID3, ID4四種分子，其中ID1的研究最為廣泛。ID1在成體組織和細胞中幾乎不表達,但有研究報道ID1在多種腫瘤中高表達,并且參與了細胞的異

4、常增殖、細胞周期進展、分化抑制、基因組不穩(wěn)定等多個環(huán)節(jié)。因此ID1作為一個候選的熱點癌基因逐步被人們認識。本文通過一系列實驗來闡述ID1與NSCLC之間的關(guān)系。
　　目的：
　　通過細胞實驗及臨床標(biāo)本的檢測來闡述ID1在NSCLC中的表達、ID1與非小細胞肺癌耐藥之間關(guān)系及ID1與NSCLC預(yù)后的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.實時熒光定量RT-PCR（qRT-PCR）方法檢測在肺腺癌癌細胞株（H522、H1975

5、、A549、PC-9、PC-9R）中ID1的表達量。
　　2.隨機獲取20例早期NSCLC患者術(shù)后標(biāo)本（性別、年齡、分期等無任何特殊要求），qRT-PCR方法分析在肺癌組織和癌旁組織中ID1 mRNA的表達，免疫組化方法檢測ID1蛋白在肺癌組織和癌旁組織中的表達量。
　　3.qRT-PCR技術(shù)分析PC-9敏感細胞株與PC-9/R耐藥細胞株中ID1 mRNA的表達量。
　　4.構(gòu)建ID1 siRNA慢病毒載體及ID1過表

6、達慢病毒載體，慢病毒載體轉(zhuǎn)染PC-9與PC-9/R細胞。不同濃度吉非替尼處理轉(zhuǎn)染細胞，MTT方法檢測細胞增殖。
　　5.取54例臨床NSCLC患者的手術(shù)標(biāo)本，免疫組化方法檢測癌組織與癌旁組織ID1的表達，分析ID1表達與患者預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.細胞實驗證實ID1在肺腺癌癌細胞株（H522、H1975、A549、PC-9、PC-9R）中均高表達。
　　2.免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)肺癌組織標(biāo)本ID1蛋白比癌旁組

7、織ID1蛋白表達量高。
　　3.qRT-PCR方法發(fā)現(xiàn)ID1mRNA的表達量在PC-9R耐藥細胞中比在PC-9敏感細胞中高表達。
　　4.MTT檢測發(fā)現(xiàn)PC-9細胞感染ID1過表達慢病毒后，對吉非替尼的IC50值有一定程度的上升，即耐藥性增加。PC-9/R細胞感染ID1干擾慢病毒后，對吉非替尼的IC50值有一定程度的下降，即對靶向藥物敏感性增加。
　　5.臨床標(biāo)本檢測證實ID1與NSCLC的預(yù)后具有一定相關(guān)性。

8、　　6.肺腺癌組織中ID1的表達量高于肺鱗癌組織中ID1的表達量。
　　結(jié)論：
　　1.ID1在非小細胞肺癌中高表達。
　　2.ID1與非小細胞肺癌EGFR-TKI耐藥相關(guān)：ID1表達量與非小細胞肺癌EGFR-TKI耐藥性呈正相關(guān)，即ID1表達量越高，細胞對EGFR-TKI耐藥性越強，ID1表達量越低，細胞對EGFR-TKI敏感性越強。
　　3.ID1與非小細胞肺癌預(yù)后相關(guān)：ID1表達量與非小細胞肺癌預(yù)后呈負相關(guān)