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文檔簡介
1、本實(shí)驗(yàn)采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄前額葉皮層內(nèi)側(cè)區(qū)Ⅴ-Ⅵ層錐體細(xì)胞興奮性突觸后電流來觀察Allo對自發(fā)的和誘發(fā)的興奮性突觸后電流的作用,采用生化測定技術(shù)研究Allo在前額葉皮層對自發(fā)的和誘發(fā)的突觸小體PKA活性的影響,同時結(jié)合藥理學(xué)方法來研究Allo對其作用的機(jī)制。結(jié)果表明20μMAllo對自發(fā)的mEPSCs和sEPSCs的幅度和頻率均無明顯作用;但可明顯抑制由去極化誘發(fā)的mEPSCs和sEPSCs頻率增加:Allo能顯著地抑制高鉀(15m
2、MKCL)和veratrindine(4μM)引起的前額葉皮層內(nèi)側(cè)區(qū)Ⅴ-Ⅵ層錐體細(xì)胞mEPSCs或sEPSCs的增加。然而,Allo對神經(jīng)遞質(zhì)誘發(fā)的mEPSCs和sEPSCs頻率增加有選擇性作用:Allo對5-羥色胺(100μM)引起的sEPSCs頻率增加無明顯作用,有趣的是Allo能明顯地抑制多巴胺(100μM)引起的sEPSCs頻率增加。為探討Allo抑制高鉀、veratrindine和多巴胺引起的sEPSCs頻率增加機(jī)制,本文又觀
3、察了PKA抑制劑H89對veratrindine引起的sEPSCs頻率增加作用的影響,Allo對腺苷酸環(huán)化酶(AC)激動劑Forskolin、細(xì)胞內(nèi)Ca2+庫釋放劑Ryanodine(1μM)和L型-鈣通道激動劑BayK引起的sEPSCs頻率增加作用的影響,以及L型-鈣通道阻斷劑verapamil和Gi蛋白阻斷劑NEM對Allo抑制veratridine誘發(fā)的sEPSCs頻率增加的影響。結(jié)果顯示:H89(10μM)能顯著抑制veratr
4、idine引起的sEPSCs頻率的增加(p<0.05);Allo不能抑制Forskolin(20μM)和Ryanodine(1μM)引起的sEPSCs頻率的增加(p>0.05),卻能抑制BayK(1μM)引起的sEPSCs頻率的增加(p<0.05);NEM不能阻斷Allo抑制veratridine誘發(fā)的sEPSCs頻率的增加,而verapamil能阻斷Allo抑制veratridine誘發(fā)的sEPSCs頻率的增加。 同時,本實(shí)驗(yàn)
5、也采用生化技術(shù)研究了GABA對veratrdine增加PKA活性的影響,以及Allo對PKA活性的作用。結(jié)果表明:50μMGABA對veratridine引起的PKA活性的增加沒有明顯的影響;Allo對基礎(chǔ)PKA活性無明顯影響,但對高鉀、veratrindine,多巴胺、5-羥色胺和L型-鈣通道激動劑BayK誘發(fā)的PKA活性的增加有明顯的抑制作用(p<0.05);Allo不能抑制AC激動劑Forskolin、D1受體激動劑SKF(10μ
6、M)、細(xì)胞內(nèi)Ca2+庫釋放劑Ryanodine(1μM)引起的PKA活性的增加;Gi蛋白阻斷劑NEM(50μM)、多巴胺D2受體阻斷劑sulpride(10μM)、T型-鈣通道阻斷劑(NiCl250μM)、N型-鈣通道阻斷劑(CTX0.5μM)、P/Q型-鈣通道阻斷劑(Aga0.5μM)均不能阻斷Allo抑制veratridine和高鉀誘發(fā)的PKA活性的增加,而L型-鈣通道阻斷劑verapamil(50μM)和nimodipine(10
7、μM)能阻斷Allo抑制高鉀誘發(fā)的PKA活性的增加。 在紋狀體,我們研究發(fā)現(xiàn)Allo和verapamil不能抑制veratridine誘發(fā)的PKA活性和sEPSCs頻率增加。 上述結(jié)果提示:Allo在前額葉皮層抑制高鉀、veratrindine和多巴胺引起的sEPSCs頻率增加及PKA活性增加的機(jī)制不是通過作用于PKA、AC、G蛋白、多巴胺D1和D2受體、細(xì)胞內(nèi)Ca2+庫釋放、T型-鈣通道、N型-鈣通道、P/Q-鈣通道等
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