馬尾松松針抗氧化活性研究及其抗氧化功能飲料研制.pdf

1、背景與目的:
　　馬尾松松針為松科植物針形葉，近年來研究發(fā)現其富含黃酮類物質、木脂類、維生素、多糖類和微量元素等天然抗氧化活性物質，且無毒，無副作用，可作為天然抗氧化劑和抗氧化功能食品的良好來源。
　　目前對馬尾松松針抗氧化活性的研究，主要集中在推測可能具有某種抗氧化活性組分的提取分離和功能評價等方面，而以“抗氧化活性”為質量控制目標，從馬尾松松針物質中篩選出具有抗氧化活性成分的研究尚未見報道。因此，本研究擬以馬尾松松針為原

2、料，以總抗氧化能力為質量控制目標，深入研究馬尾松松針抗氧化活性以及研制抗氧化功能飲料，為開發(fā)利用馬尾松松針資源，以及研制新型天然抗氧化產品提供科學依據。
　　本課題組前期研究了馬尾松松針抗氧化活性成分的提取、分離、純化和組分分析方法，以及對馬尾松松針抗氧化提取液進行抗疲勞活性功能評價。在此基礎上，本研究擬從提取分離方法加以改進和完善，并對馬尾松松針抗氧化提取液進行抗氧化功能評價，以明確其抗氧化功能，同時進一步研制馬尾松松針系列功能

3、飲料，為開發(fā)利用馬尾松松針資源，以及研制新型天然抗氧化產品提供科學依據。
　　方法:
　　1、提取工藝
　　單因素試驗中，除了考察料液比、時間和溫度對提取效果的影響，加入提取溶劑作為考察因素，并在單因素結果的基礎上選取各因素較優(yōu)的三個水平進行正交試驗，優(yōu)選出最佳提取工藝條件。
　　2、分離純化
　　采用柱層析法，選擇大孔吸附樹脂為柱填料對總抗氧化能力最高的提取液進一步分離純化。通過靜態(tài)吸附與解吸試驗，從NK

4、A-9、AB-8、D101這幾種極性不同的大孔吸附樹脂中篩選出適合分離純化馬尾松松針抗氧化活性成分的填料，并經過分級洗脫，評價各洗脫部分的總抗氧化能力，選擇總抗氧化能力最強的洗脫部位進行下一步的抗氧化功能評價。
　　3、抗氧化功能評價
　　結合體外實驗和體內試驗綜合評價馬尾松松針純化液的抗氧化功能。體外試驗檢測指標主要包括總抗氧化能力、羥自由基清除能力和超氧陰離子清除能力。體內試驗參照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003

5、版）中的抗氧化功能評價方法進行動物實驗，取血檢測血清過氧化脂質物質丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）活力、過氧化氫酶(CAT)活力。
　　4、成分分析
　　將明確具有抗氧化功能的純化液進行紫外-可見光掃描初步鑒定抗氧化活性成分，然后采用化學定性分析法加以佐證或排除，最后根據高效液相色譜-質譜法得到的化合物保留時間、分子量及碎片離子峰等信息，并結合數據庫和文獻資料分析馬尾松松針

6、中的抗氧化活性成分。
　　5、抗氧化功能飲料研制
　　以松針、綠茶為主要原料，通過單因素試驗、正交試驗和感官評價確定最佳浸提工藝及飲料配方，研制具有抗氧化活性的松針綠茶復合飲料。
　　結果:
　　1、提取工藝
　　通過單因素分析和正交試驗，得到馬尾松松針抗氧化活性成分的最優(yōu)提取工藝為:提取溶劑為0％乙醇（即超純水），料液比為1:40，提取溫度80℃，提取時間90分鐘。通過驗證試驗表明在最優(yōu)工藝條件下提取液的

7、總抗氧化能力為183.293 U/ml,與前期研究的結果相當。同時驗證了在本課題組的工藝研究中，水是最佳的提取溶劑。
　　2、分離純化
　　與AB-8、D101大孔樹脂相比，NKA-9大孔吸附樹脂最適合用于分離純化馬尾松松針抗氧化活性成分。通過對上樣量、洗脫劑濃度、洗脫劑流速和洗脫劑用量的考察，確定了NKA-9大孔吸附樹脂柱層析分離純化馬尾松松針抗氧化活性成分的條件為：上樣量9BV，洗脫劑為40%乙醇，洗脫流速3BV/h，洗

8、脫體積3BV。
　　通過高效液相色譜分析，本研究純化后得到的馬尾松松針提取液比純化前，以及本課題組前期研究得到的純化液的雜質少，純化效果較好。
　　3、抗氧化功能評價
　　純化后的馬尾松松針抗氧化成分PNPM-2的總抗氧化能力、清除羥自由基和超氧陰離子的能力均比純化前的馬尾松松針抗氧化成分PNPM-1強，且PNPM-2與同質量濃度Vc進行對照實驗表明，總抗氧化能力相接近，羥自由基清除能力略低于Vc，但清除超氧陰離子自由

9、基的能力在低濃度時明顯高于Vc。
　　體內抗氧化實驗中，與模型組相比，馬尾松松針抗氧化成分和Vc均可降低小鼠血清MDA含量，提高小鼠血清SOD、GSH-Px及CAT活力水平，差異具有統(tǒng)計學意義，且馬尾松松針抗氧化成分PNPM-2隨著質量濃度的增大，抗氧化功效越顯著。
　　4、成分分析
　　利用LC-MS，結合化學顯色鑒定、紫外-可見波譜進行分析，并充分利用質譜數據庫和文獻數據初步推出馬尾松松針中的抗氧化活性成分是兒茶素

10、，與前期結果基本一致，同屬于黃酮類物質。
　　5、抗氧化功能飲料最佳配方
　　在松針與綠茶（g:g）配比為1:1，料水比（g:ml）為1:80，提取時間為30分鐘，浸提溫度為90℃；白砂糖添加量為3%，檸檬酸添加量為0.01%，蜂蜜添加量為0.1%參數下研制的松針綠茶復合茶飲料不僅具有獨特的松針和綠茶香味，口感宜人且具有較強抗氧化活性，其中總抗氧化能力為149.492U/ml，羥自由基清除能力為27.860U/ml，茶多酚含

11、量為1941.183mg/kg。
　　結論:
　　1、優(yōu)化提取工藝，并經NKA-9大孔吸附樹脂分離純化后得到了更高活性和純度的馬尾松松針純化液。
　　2、對馬尾松松針純化液進行抗氧化功能評價及成分分析，初步鑒定了具有顯著抗氧化效果的活性組分主要為兒茶素。
　　3、以馬尾松松針、綠茶為主要原料，通過單因素試驗、正交試驗和感官評價確定最佳浸提工藝及飲料配方，研制出的松針綠茶復合茶飲料不僅具有獨特的松針和綠茶香味，口感