一種高通量克隆方法及其在人類肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)上的應(yīng)用.pdf

1、將外源基因克隆到載體上的過程包括以下幾個(gè)步驟：PCR擴(kuò)增目的基因，產(chǎn)生用于連接的平末端或粘性末端，再將PCR產(chǎn)物插入到合適的載體上。有很多種方法將PCR產(chǎn)物插入載體，如將限制性位點(diǎn)插入到PCR產(chǎn)物的末端、平末端插入、TA克隆、異位交錯(cuò)克隆、不依賴連接的克隆、活體克隆等。但是，這些方法都沒有應(yīng)用于大規(guī)模的克隆。 大量的基因組測序計(jì)劃的完成，使得數(shù)目龐大，功能未知的ORF得到識(shí)別，必須將這些基因轉(zhuǎn)移到各種不同的載體，進(jìn)行基因的表達(dá)

2、和其它功能分析。這就需要出現(xiàn)大規(guī)模高通量的克隆系統(tǒng)。目前，應(yīng)用較多的高通量克隆系統(tǒng)，有Gateway克隆系統(tǒng)、Clontech克隆系統(tǒng)、Univector融合系統(tǒng)等，這些克隆系統(tǒng)已被商業(yè)化，尤其是Gateway克隆系統(tǒng)應(yīng)用范圍極為廣泛。但是，因?yàn)楦鱾€(gè)系統(tǒng)都要用到商品化的重組酶，所用的同源序列也較長，故價(jià)格昂貴，克隆過程費(fèi)用較高。 鑒于大規(guī)模克隆的用途，在別人研究的基礎(chǔ)上，我們實(shí)驗(yàn)室建立了一種適用于高通量克隆的方法。這種方法采用