“天然植物抗菌液”(PAMs)抗炎功效及初步作用機理研究.pdf

1、現(xiàn)如今各種急慢性炎癥所引發(fā)的疾病嚴(yán)重影響著人類健康，同時造成巨大社會經(jīng)濟浪費，因此開發(fā)更多安全改善藥物成為當(dāng)務(wù)之急。天然植物抗菌液(PAMs)1號和2號（K1和K2）是由云南普洱丹州制藥有限公司生產(chǎn)的民族醫(yī)藥產(chǎn)品，前期研究發(fā)現(xiàn)，其具有抑菌消毒、鎮(zhèn)痛、抗糖尿病足潰瘍以及對白血病K562細(xì)胞的促凋亡作用等功效，但對其功效成分、抗炎機制、皮膚炎癥改善效果尚不清楚，故進行本次研究。
　　首先采用HPLC法，以藥典條件為參考，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)K1

2、和K2中含有尿囊素分別為552.61μg/mL和502.33μg/mL，羥基紅花黃色素A分別為204.04μg/mL和62.51μg/mL，但只有K2中檢測到微量的薯蕷皂苷元為49μg/mL和草烏甲素為14μg/mL。
　　其次選用K2為抗炎機制研究的樣品，一方面測定K2對各類型細(xì)胞活力影響進行探究，發(fā)現(xiàn)其對肝癌HpG2、肺癌A549、RAW264.7細(xì)胞具有劑量依賴性的抑制作用(p＜0.05)。另一方面利用LPS誘導(dǎo)RAW264

3、.7巨噬細(xì)胞建立細(xì)胞炎癥模型，經(jīng)K2預(yù)處理后，細(xì)胞上清中促炎癥介質(zhì)NO明顯被抑制(p＜0.0001)，胞內(nèi)ROS被清除，均表現(xiàn)出具有明顯的劑量依賴性抑制作用(p＜0.001)，與炎癥密切相關(guān)的蛋白COX-2、iNOS蛋白均出現(xiàn)下調(diào)(p＜0.05)，并且利用熒光雙染法觀察到其抑制NF-kappaB炎癥通路中的p65蛋白細(xì)胞核轉(zhuǎn)移。綜上，K2通過清除ROS活性，下調(diào)NO產(chǎn)物，COX-2、iNOS蛋白來減輕炎癥，推測K2對MAPK和NF-kB

4、通路具有抑制作用，可能具有多通路抗炎活性。
　　此外利用2，4-二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)BALB/c小鼠建立變應(yīng)性接觸性皮炎(ACD)模型，給予不同處理后，陽性組，K1及K2組耳部腫脹和血管充血得到改善，并且其外周血中的TNF-α，IL-1β水平不同程度下降(p＜0.05)，HE染色提示其表皮增厚和淋巴細(xì)胞浸潤明顯減少。同時免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，K1及K2組中TNF-α，Ki67蛋白表達(dá)均下調(diào)(p＜0.001)，并利用

5、Western blotting定量Ki67蛋白表達(dá)分析進一步得到確認(rèn)。說明增殖與腫脹水平呈正相關(guān)，K1及K2組能不同程度減輕炎癥，且K1效果好于K2。從肝脾指數(shù)可知，K1及K2組與空白組無顯著差異(p＞0.05)，且低于模型組。推測K1和K2對ACD療效可能是通過阻斷細(xì)胞炎癥因子（TNF-α，IL-1β）以及抑制細(xì)胞增殖來達(dá)到減輕病灶部位腫脹和炎癥的功效，并且具有保肝護脾的優(yōu)點。
　　綜上，天然植物抗菌液中含有豐富的尿囊素和羥基