文昌魚尾部再生過程的形態(tài)組織細胞學及BMP2-4基因的表達模式研究.pdf

1、動物再生(Regeneration)是生物體可以重新生長出或構建恢復失去或損傷的組織或器官過程。相關研究主要集中于幾種模式生物,但是在頭索動物文昌魚中的相關研究卻比較匱乏。本文首次對青島文昌魚尾部再生的過程進行形態(tài)學觀察和細胞組織學分析;同時在克隆了 BMP基因 cDNA的基礎上,研究了其在文昌魚尾部再生過程中的時空表達模式和相對表達量的變化規(guī)律。
　　首先,形態(tài)學觀察記錄了文昌魚在切除尾部(肛門后切除)之后的再生過程。發(fā)現文昌魚

2、的尾部再生過程大約需要4個月的時間;在此基礎上,利用組織學切片技術和 HE染色的方法對不同再生時期文昌魚尾部進行了細胞組織學分析,發(fā)現文昌魚再生展現了類似于脊椎動物新建再生的特點。文昌魚尾部再生大體經歷三個階段:第一個階段傷口愈合期,在手術切除尾部后,傷口附近的表皮細胞通過增值和細胞遷移逐漸在損傷處形成受傷表皮層(wound epidermis),進而覆蓋整個傷口,這個過程大約持續(xù)2周左右;第二個階段再生胚基期,大約在三周后,在不斷增厚

3、的表皮層下方,出現了類似于間質細胞的細胞集體,而且隨著細胞數量的增加,細胞集體體積增大,向外突起,稱之為再生胚基;第三個階段細胞分化和形態(tài)發(fā)生期,各種細胞和組織結構開始分化和形成,例如在七周之后再生肌肉組織和脊索可見。此外,本文還運用 TUNEL技術對文昌魚再生時期的細胞的凋亡進行了研究,發(fā)現細胞凋亡主要發(fā)生在再生早期階段,在尾部切除傷口附近檢測到了明顯的細胞凋亡陽性信號。
　　在上述形態(tài)組織細胞學分析的基礎上,我們還研究了文昌魚

4、 BMP2/4基因在再生過程中的表達規(guī)律。首先利用原位雜交技術對 BMP2/4基因的時空表達模式進行了研究,發(fā)現 BMP2/4基因主要在再生早期(1-14天),切口附近表達,在再生過程中隨著時間的推移,BMP2/4基因在組織上的表達信號逐漸減弱,直至傷口愈合后,14天之后沒有檢測到明顯的陽性信號。其次,利用 Real-Time PCR技術,研究了文昌魚尾部再生組織過程中 BMP2/4基因表達強度的變化,結果表明,以正常尾部為對照,再生的