基于脂肪干細胞可注射組織工程骨的構建與骨不連修復.pdf

1、目的：
　　脂肪干細胞（adipose-derived stem cells，ASCs）因具有良好的成骨分化潛能而常被用作骨組織工程種子細胞。本研究將小鼠ASCs接種于聚谷氨酸芐酯（Polyγ-benzyl-L-glutamate，PBLG）微球，進行成骨誘導后，局部注射干預小鼠股骨骨不連模型。觀察由ASCs與PBLG微球構建的可注射性組織工程骨，對小鼠股骨骨不連的修復作用，為骨不連的臨床治療探索新的途徑。
　　方法：

2、>　　取第三代小鼠ASCs，約以1×107ASCs混合60mgPBLG進行成骨誘導；
　?。?）DiO熒光標記、電鏡掃描觀察ASCs在PBLG上的粘附、增殖情況。
　?。?）以未誘導組作為對照，定性和定量方法分別檢測堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）、細胞外鈣鹽沉積情況。
　?。?）于C57小鼠股骨中部造成2mm骨缺損，分別以髓內釘、髓內釘聯(lián)合“U”型夾的方法進行固定；模型建立后12周通過X

3、線、microCT與組織學檢查，觀察骨不連模型形成情況。
　?。?）將ASCs/PBLG組織工程骨0.1ml局部注射于鼠股骨骨不連處（n=5）；單純注射PBLG微球0.1ml（n=5）、PBS0.1ml（n=5)分別作為對照組，通過X線、microCT及組織學等方法觀察骨不連修復情況。
　　結果：
　?。?）體外成骨誘導14天，DiO熒光標記證明細胞在微載體內生長良好，掃描電鏡觀察到微載體表面細胞外基質的沉積。與未成骨

4、誘導組相比，成骨誘導后10-14天成骨指標ALP及Ca離子顯著增高。
　　（2）建立2mm小鼠股骨骨缺損，單純以髓內針固定，骨缺損術后12周骨不連形成率為60％；加用“U”型夾術后12周全部形成骨不連，骨缺損間隙無短縮。
　?。?）選用髓內針/“U”型夾固定的小鼠骨不連模型，局部注射負載成骨誘導ASCs的PBLG微球，8周后X片顯示ASCs/PBLG組骨缺損處雙側均有骨性骨痂相連，MicroCT顯示骨缺損處骨性連接，組織學切