miR-423、miR-18b、miR-129在老齡小鼠心衰過(guò)程中的表達(dá).pdf

1、背景及目的：
　　隨著人口老齡化，心力衰竭（簡(jiǎn)稱(chēng)心衰）基礎(chǔ)疾?。ü谛牟?、高血壓病、心肌梗死等）的發(fā)病率逐年升高，心衰的發(fā)病率及死亡率也隨之不斷提高。尋找一種既能診斷心衰又能較好反映其嚴(yán)重程度的檢測(cè)指標(biāo)有著重要的臨床意義。心衰發(fā)展過(guò)程中伴隨著多種結(jié)構(gòu)的改變，如心肌細(xì)胞肥大、凋亡、間質(zhì)纖維化、毛細(xì)血管數(shù)量減少及免疫系統(tǒng)的激活等，結(jié)構(gòu)的改變引起心臟功能的變化（如射血量降低、充盈壓增高等），但是潛在的分子機(jī)制尚未闡明。微小RNA（miRN

2、As）是具有21-25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性小分子RNA。近年來(lái)，大量研究表明血清中的 miRNAs已作為多種組織損傷及病理過(guò)程的敏感和特異的生物標(biāo)志物。miRNAs通過(guò)多種心臟病理改變引起心肌重構(gòu)、心功能降低，最終導(dǎo)致心力衰竭。因此，我們可以通過(guò)一些特定的 miRNAs水平來(lái)診斷心力衰竭。本研究包括：1）建立老齡小鼠心衰模型，觀察老齡小鼠心衰過(guò)程中miR-423、miR-18b、miR-129的表達(dá)差異。2）研究老齡小鼠在心衰發(fā)生發(fā)展過(guò)程中

3、，miR-423的表達(dá)趨勢(shì)，探討其與心衰的關(guān)系，為心衰的診斷或預(yù)后提供價(jià)值。
　　方法：
　　1.18月齡雄性健康小鼠共54只，按照投硬幣方法隨機(jī)分成2組。心衰組（n=38）：常規(guī)飼養(yǎng)，于腹部皮下注射異丙腎上腺素（ISO）持續(xù)14天，構(gòu)造老齡小鼠心力衰竭模型；對(duì)照組（n=16）：常規(guī)飼養(yǎng)，相同方法注射等量生理鹽水14天。注射后繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)4周。2.4周之后行超聲心動(dòng)圖和心電圖，比較兩組心臟結(jié)構(gòu)、功能和心率。然后處死小鼠10只

4、（心衰4w組），取心臟標(biāo)本，分別給予全心及左室稱(chēng)重，計(jì)算出左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）。心肌標(biāo)本經(jīng)固定、脫水、包埋后，切得組織切片，分別給予常規(guī)HE染色。3.繼續(xù)飼養(yǎng)2周后處死小鼠10只（心衰6w組），剩余小鼠繼續(xù)飼養(yǎng)2周后處死（心衰8w組）。處死后按壓小鼠的眼球取血4ml，離心后收集上清液。4.從血漿中提取總 RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得相應(yīng)miRNA的cDNA，以β-actin為內(nèi)參進(jìn)行標(biāo)定，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)技術(shù)檢

5、測(cè)miR-423、miR-18b、miR-129在心衰小鼠及正常小鼠血清中的表達(dá)。5.用PCR檢測(cè)miR-423在各組血清中表達(dá)量，并進(jìn)行對(duì)比。6.應(yīng)用 SPSS16.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x?s）表示，計(jì)量資料若滿足正態(tài)性，采用t檢驗(yàn)，若不滿足正態(tài)性，采用秩和檢驗(yàn)；多組比較用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI，mg/g)

6、比較：對(duì)照組為2.68±0.32，心衰組為5.70±0.54。與對(duì)照組比較，心衰組左室質(zhì)量指數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　2.HE染色：正常對(duì)照組小鼠的心肌細(xì)胞輪廓完整，肌纖維布列一致；心衰組小鼠心肌纖維部分中斷，心肌細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度的水腫、心肌細(xì)胞肥大，有局灶性或者片狀壞死灶。
　　3.心臟彩超：心衰組心室腔明顯增大，心率較快，左室短軸收縮功能障礙更明顯（P<0.05）。
　　4.心電圖：與對(duì)照

7、組相比，心衰組心率較快，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　5.miR-423、miR-18b、miR-129表達(dá)量比較：心衰小鼠血清中miR-423表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P＜0.001）,miR-18b、miR-129的表達(dá)與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.心衰后不同時(shí)間，PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR-423的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.與對(duì)照組相