同型半胱氨酸在小鼠高血壓腦出血中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 高同型半胱氨酸血癥并未增加高血壓小鼠腦出血風(fēng)險(xiǎn)
　　目的:心、腦血管疾病已經(jīng)成為我國(guó)的第一大死因，中國(guó)現(xiàn)有腦卒中至少700萬(wàn)，腦卒中造成重大健康負(fù)擔(dān)。腦出血是腦卒中的常見(jiàn)類型，霍勇等在07年的研究發(fā)現(xiàn)高同型半胱氨酸型高血壓約占我國(guó)人群的75％，目前關(guān)于高同型半胱氨酸血癥與缺血性腦卒中關(guān)系的研究較多，但針對(duì)出血性卒中的研究相對(duì)較少，且存在爭(zhēng)議。因此本研究在動(dòng)物水平上直接升高血中同型

2、半胱氨酸水平，以觀察同型半胱氨酸對(duì)出血性卒中的影響。
　　方法:采用8月齡的雄性C57BL/6小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)總共分為四組:第一組為同型半胱氨酸(Hcy)+血管緊張素Ⅱ(AngⅡ);第二組為Hey+AngⅡ+N-硝基-L-精氨酸甲酯基精氨酸(L-NAME)組;第三組為AngⅡ+L-NAME組;第四組為AngⅡ組。AngⅡ用來(lái)提升小鼠血壓，L-NAME為精氨酸合酶抑制劑，用于誘導(dǎo)腦出血的發(fā)生。小鼠首先使用含有Hey的水喂養(yǎng)6周，

3、之后后背皮下包埋含有AngⅡ的ALZET微滲透壓泵，同時(shí)水中喂養(yǎng)L-NAME。Hey濃度為1.8g/L; AngⅡ的濃度為1000ng/kg/min;L-NAME的濃度為100mg/kg/day。在小鼠出現(xiàn)腦卒中的行為學(xué)現(xiàn)象時(shí)將其麻醉處死，部分小鼠行影像學(xué)檢查，取大腦和血清保存。飼養(yǎng)時(shí)間總共為18周。通過(guò)繪制生存曲線來(lái)描述同型半胱氨酸與腦卒中的關(guān)系。同時(shí)采用BP-2000測(cè)量小鼠血壓;全自動(dòng)生化分析儀測(cè)量小鼠血中Hey濃度;MR監(jiān)測(cè)小鼠

4、的出血位點(diǎn)位置;利用HE染色測(cè)量小鼠出血面積;利用免疫組化染色計(jì)算出血位點(diǎn)血管的平滑肌細(xì)胞個(gè)數(shù)。
　　結(jié)果:小鼠喂養(yǎng)Hey6周后血清中Hey濃度升高到23.07umol/L，18周后小鼠血清中平均Hey濃度為41.51umol/L;血壓在170-180mmHg之間。各組間小鼠因腦出血死亡的個(gè)數(shù)為:Hey+AngⅡ組2只;Hey+AngⅡ+L-NAME組10只;AngⅡ+L-NAME組10只;AngⅡ組0只。Hey+AngⅡ+L-N

5、AME組與AngⅡ+L-NAME組的生存曲線p值為0.162。AngⅡ+Hey+L-NAME組與AngⅡ+L-NAME組沒(méi)有差異，提示同型半胱氨酸對(duì)腦出血的發(fā)生也沒(méi)有促進(jìn)作用。
　　結(jié)論:結(jié)果顯示高同型半管氨酸對(duì)高血壓小鼠腦出血的發(fā)生沒(méi)有影響。
　　第二部分 葉酸對(duì)H型高血壓小鼠腦出血的影響
　　目的:H型高血壓約占我國(guó)成年高血壓患者的75％，高水平的血漿同型半胱氨酸(Hcy)是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。現(xiàn)有研究表明

6、，通過(guò)服用葉酸降低同型半胱氨酸水平能夠降低腦卒中的發(fā)病率，但對(duì)單純的出血性腦卒中的作用存在爭(zhēng)議。因此，本研究在動(dòng)物水平上探討葉酸是否能夠降低出血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)。
　　方法:八個(gè)月的C57BL/6小鼠分為H型高血壓腦出血組（20只）和H型高血壓腦出血+葉酸組（17只）。在小鼠出現(xiàn)腦卒中行為學(xué)現(xiàn)象時(shí)將小鼠處死取血和大腦組織保存并進(jìn)行HE染色及免疫組化染色確定小鼠的出血位點(diǎn)。18周后將所有小鼠處死，通過(guò)SPSS19.0分析小鼠的K-M曲

7、線對(duì)比兩組之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:通過(guò)行為學(xué)及最終的病理檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)H型高血壓組10只死于腦出血，H型高血壓+葉酸組13只死于腦出血。經(jīng)過(guò)生存曲線對(duì)比H型高血壓組和H型高血壓+葉酸組發(fā)現(xiàn)兩組之間沒(méi)有差異，p=0.127。
　　結(jié)論:葉酸不能降低H型高血壓小鼠發(fā)生出血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)。
　　第三部分 高血壓小鼠腦出血血管內(nèi)彈性膜的病理結(jié)構(gòu)變化
　　目的:高血壓腦出血是腦卒中的常見(jiàn)類型，盡管其發(fā)病率較缺血性卒中低，但其發(fā)

8、病兇險(xiǎn)，預(yù)后較差，目前對(duì)高血壓條件下腦血管病理改變并導(dǎo)致出血知之甚少，本研究擬通過(guò)高血壓腦出血小鼠模型研究高血壓腦出血血管病變機(jī)制。
　　方法:將8個(gè)月的雄性C57BL/6小鼠分為兩組，一組高血壓腦出血組，另一組是正常對(duì)照組，每組10只。在小鼠出現(xiàn)腦卒中行為學(xué)現(xiàn)象時(shí)將小鼠處死并將大腦組織保存，制作石蠟切片。采用HE染色確定出血位點(diǎn)，采用彈力纖維染色觀察出血部位血管的結(jié)構(gòu)及病理變化。
　　結(jié)果:經(jīng)HE染色找出出血位點(diǎn)，在腦出血