生姜和玉簪花生物活性成分研究.pdf

1、生姜（Zingiber officinale Rosc.）是姜科植物的新鮮根莖，為多年生草本植物。生姜廣范種植于世界各地，在日常生活中是一種不可或缺的根莖類(lèi)的辛香調(diào)味品。玉簪花[Hosta plantaginea(Lam.)Aschers]為百合科玉簪屬植物，是臨床常用的蒙藥之一。本課題采用CO2超臨界流體萃取技術(shù)和傳統(tǒng)的提取法對(duì)原藥材進(jìn)行活性成分提取;使用MCI硅膠、正相硅膠、大孔樹(shù)脂、反相硅膠、凝膠Sephadex LH-20和高效

2、液相色譜等多種色譜分離技術(shù)系統(tǒng)的研究了兩種藥用植物——生姜和玉簪花的化學(xué)成份，然后綜合運(yùn)用現(xiàn)代多種光譜學(xué)方法(1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、COSY、NOESY、HR-TOF-ESI-MS、X-ray和IR等）對(duì)所得化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并對(duì)其體外抗腫瘤活性進(jìn)行了篩選。通過(guò)分離得到了28個(gè)化合物（9個(gè)從生姜中分離得到;19個(gè)從玉簪花中分離得到），鑒定了其中的16個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)。從玉簪花分離得到的化合物中，4個(gè)化合物被確

3、定為新化合物(HP-6，HP-7，HP-10，HP-16)，3個(gè)化合物(HP-1，HP-15，HP-17)為玉簪中首次分離。
　　從生姜中分離得到9個(gè)化合物，確定了其中5個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，均為姜酚類(lèi)化合物。所鑒定化合物分別是:ZR-1:5-羥基-1-（4-羥基-3-甲氧基）-3-辛酮;ZR-3:5-羥基-1-(4-羥基-3-甲氧基)-3-癸酮;ZR-4:5-羥基-1-（4-羥基-3-甲氧基）-3-十二酮;ZR-8:5-羥基-1-（4

4、-羥基-3-甲氧基）-3-十四酮;ZR-5:5-羥基-1-(4，5-二羥基-3-甲氧基)-3-癸酮。
　　從玉簪花中分離得到19個(gè)化合物，確定了其中11個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，包括苯丙素類(lèi)、甾體類(lèi)和糖苷類(lèi)等物質(zhì)。它們分別是:HP-1:鄰苯二甲酸雙-(2-甲基)-庚酯;HP-2:3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-丙烯酸甲酯;HP-3:(1E，4E)-1，5-雙-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-1，4-二烯-3-戊酮;HP-4:4-羥基-3-甲

5、氧基苯甲酸;HP-6:(25R)-2α，3β，17β，24β-四羥基-5α-螺甾烷;HP-7:(25R)-2α，3β，24β-三羥基-5α-螺甾-9(11)-烯-12酮;HP-8:(25R)-2α，3β-二羥基-5α-螺甾-9(11)-烯-12酮;HP-10:16，22-氧代-26-羥基膽甾-4-烯-3-酮;HP-15:(2S)-1-O-亞麻烯?；?3-O-β-D-吡喃半乳糖基甘油;HP-16:(2S)-1-O-(10，13)-十七烯酰

6、基-3-O-β-D-吡喃半乳糖基甘油;HP-17:1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S，3R，4E，8Z)-2-[（2-羥基十六烷?；０被鵠-4，8-十八碳二烯-1，3-二醇。
　　我們對(duì)上述16個(gè)化合物的體外抗腫瘤活性進(jìn)行了篩選，研究了這些化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，并初步探討其抗腫瘤作用的分子機(jī)制。從生姜中分離鑒定的5個(gè)化合物對(duì)人乳腺癌、肺癌、肝癌和食管癌細(xì)胞增殖的影響結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ZR-4和ZR-8抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用較

7、明顯，尤以ZR-8的抑制作用最強(qiáng)。ZR-8對(duì)乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞的IC50分別為25.80±1.39μmol/L和35.29±2.70μmol/L。流式細(xì)胞術(shù)研究結(jié)果表明，ZR-4和ZR-8可引起乳腺癌細(xì)胞周期阻滯在G1期，其中ZR-8作用于MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞24h后G1期細(xì)胞的百分比分別為(66.73±2.93)％和(66.59±2.49)％，而對(duì)照組G1期細(xì)胞的百分比分別為(47.39±1.9

8、7)％和(49.17±3.52)％，處理組和對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。Western blot結(jié)果表明，ZR-4和ZR-8處理MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞后，可引起G1期相關(guān)蛋白CyclinD1和CDK4的表達(dá)下調(diào)，并可降低MAPK信號(hào)通路中ERK的磷酸化水平，增強(qiáng)p38的磷酸化水平。將玉簪花中分離鑒定的化合物作用于人乳腺癌和肝癌細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，HP-8對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖的抑制作用較明顯;HP-

9、6和HP-8對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用較明顯，尤以HP-6的抑制作用最強(qiáng)。HP-6和HP-10對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖的抑制作用較明顯。以上結(jié)果表明，不同化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用不同，提示這些化合物可選擇性地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
　　本課題通過(guò)對(duì)藥用植物的系統(tǒng)研究，為進(jìn)一步研制和開(kāi)發(fā)新型抗腫瘤藥物提供了科學(xué)依據(jù)和有價(jià)值的潛在先導(dǎo)化合物，也將藥用植物進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為抗腫瘤活性藥物研究積累了新的理論基礎(chǔ)，對(duì)后續(xù)