灰海參生物活性成分研究.pdf

1、灰海參(Holothuria grisea Selenka),為棘皮動物門(Echinodermata)海參綱(Holothuroidea)海參科(Holothuriidae)海參屬(Holothuria)的海洋動物。廣泛分布在佛羅里達(dá)南部經(jīng)巴哈馬至巴西的廣大海域,可供食用。日本學(xué)者曾于八十年代初對此種海參進(jìn)行過初步研究,僅從中分離得到兩個海參皂苷,holothurin A和holothurin A1,為深入研究該種海參的的化學(xué)成分和藥

2、理活性,我們對其進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。本研究以稻瘟霉模型作為活性監(jiān)測手段,應(yīng)用正相硅膠、反相硅膠、葡聚糖凝膠以及高效液相色譜等多種色譜分離技術(shù),對灰海參活性成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化和生物活性研究,共分離得到12個單體化合物,應(yīng)用現(xiàn)代波譜技術(shù)和化學(xué)手段鑒定了其中8個化合物的結(jié)構(gòu),均為海參皂苷類化合物,其中新化合物2個,另外有4個化合物為首次從該海參中分離獲得。其余的4個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)正在鑒定中。 所確定的8個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)是通過

3、1HNMR、13CNMR和二維核磁共振技術(shù)(DQCOSY、TOCSY、HMQC、HMBC和NOESY等)及電噴霧離子質(zhì)譜并結(jié)合化學(xué)方法(水解,化學(xué)鑒別)確定的。這8個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下:HG-1:3β-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(→2)-β-D-吡喃木糖-(4→1)-β-D-吡喃葡萄糖]-22,25-環(huán)氧-海參-9(11)-烯-3β,12α-二醇(命名為gr

4、iseaside A);HG-2:3-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(1→2)-4-O-硫酸鈉-β-D-吡喃木糖]-22,25-環(huán)氧-海參烷-9(11)-烯-3β,12α,17α-三醇(holothurin A);HG-3:3-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(1→2)-4-O-硫酸鈉-β-D

5、-吡喃木糖]-海參烷-9(11)-烯-22-羥基-3β,12α,17α-三醇(holothurin A1):HG-4:3-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-(→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(1→2)-4-O-硫酸鈉-β-D-吡喃木糖]-海參烷-9(11)-烯-3β,12α,17α-三醇(echinoside A);HG-5:3β-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-

6、(1→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(1→2)-β-D-吡喃木糖-(4→1)-β-D-吡喃葡萄糖]-海參烷-9(11)-烯-22-羥基-3β,12α-二醇(命名為griseaside B);HG-6：3-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(1→2)-4-O-硫酸基-β-D-吡喃木糖]-22,25-環(huán)氧-海參烷-9(11)-烯-3β,12α,17α-三醇(arenicolas

7、ide A);HG-7:3-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(1→2)-4-O-硫酸鈉-β-D-吡哺木糖]-22,25-環(huán)氧-海參烷-9(11)-烯-3β,12α-二醇(fuscoineroside C):HG-8:3-O-[3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃奎諾糖-(1→2)-β-D-吡喃木糖-(4→1)-β

8、-D-吡喃葡萄糖]-22,25-環(huán)氧-海參烷-9(11)-烯-3β,12α,17α-三醇(holothurinoside A),其中HG-1和HG-5為新化合物。 初步的藥理活性篩選表明,海參皂苷HG-1～HG-8對稻瘟霉顯示顯著的生物活性：對BEL-7402人肝癌細(xì)胞、HL-60人白血病細(xì)胞、A-549人肺癌細(xì)胞和Molt-4人白血病細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性,除HG-5活性相對較弱外,其余7個化合物對四種腫瘤細(xì)胞株的抑制率均在

9、10-5-10-8mol/L之間；HG-1～HG-8對白色念珠菌、新生隱球菌、克柔式念珠菌、光滑念珠菌和近平滑念珠菌均具有不同強(qiáng)度的抑制生長作用,其中化合物HG-1對白色念珠菌和新生隱球菌的MIC80值均達(dá)到4.0μg/ml。 本課題對灰海參體內(nèi)的化學(xué)成分特別是皂苷類成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離,得到2個新的海參皂苷和6個已知海參皂苷,并對其藥理活性進(jìn)行了初步研究。研究結(jié)果為進(jìn)一步研制開發(fā)新的抗腫瘤和抗真菌藥物提供了一定的科學(xué)依據(jù)和有價