2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、乙肝病毒(hepatitis B Virus,HBV)感染是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染性疾病之一,可引起人類急、慢性肝炎,甚至發(fā)展為肝硬化或肝細(xì)胞癌。目前臨床上主要用核苷(酸)類藥物發(fā)揮抗病毒作用治療乙肝,如拉米夫定、恩替卡韋、阿德福韋酯和替諾福韋等。然而通過長期的臨床治療用藥表明HBV易發(fā)生變異從而產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象,增加了對乙肝治療的困難。因此,研究開發(fā)新的抗病毒藥物特別是具有抗耐藥乙肝病毒活性的藥物是很有必要的。
  本課題分兩部

2、分進(jìn)行,第一部分主要采用轉(zhuǎn)染野生型HBV的HepG2細(xì)胞構(gòu)建而成的HepG2.CW細(xì)胞株為篩選模型,分別采用CCK-8法、ELISA法和FQ-PCR法對CL系列54個新的化合物體外抗HBV活性進(jìn)行初步研究,并從中篩選出具有低毒、高效的抗 HBV化合物;第二部分是采用拉米夫定耐藥型HBV細(xì)胞HepG2.211和拉米夫定及恩替卡韋雙耐藥的HepG2.LER細(xì)胞株為體外研究模型,對化合物α-DDB-FNC體外抗耐藥乙肝病毒的活性進(jìn)行探討。第一

3、部分:CL系列54個化合物體外抗HBV活性初步篩選。[目的]從54個新型化合物中篩選出細(xì)胞毒性相對較低、具有較好的抗HBV活性的化合物。[方法]體外研究主要選用能夠表達(dá) HBV抗原標(biāo)志物以及分泌 HBV顆粒的HepG2.CW細(xì)胞株為模型,恩替卡韋作為陽性對照。首先采用CCK-8法檢測不同濃度的受試樣品對細(xì)胞的毒性,再通過酶聯(lián)免疫吸附法( Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)檢測不同濃度的受試

4、樣品作用后第9天對HepG2.CW細(xì)胞上清中HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用,對54個化合物進(jìn)行初步研究,篩選出具有體外抗HBV活性的化合物,最后采用實時熒光定量PCR法檢測初篩出的活性樣品對細(xì)胞上清HBV DNA復(fù)制的影響,進(jìn)一步評價樣品抗HBV效果。[結(jié)果](1)通過對CL001~CL042這42個化合物抗HBV活性的初步篩選,發(fā)現(xiàn)有7個樣品能夠較好地抑制HBV DNA的復(fù)制,然后檢測篩選出的7個樣品對細(xì)胞的毒性,發(fā)現(xiàn)化合物CL

5、005和CL042具有較低的細(xì)胞毒性,細(xì)胞半數(shù)毒性濃度(CC50)均大于1000μM;這兩個化合物在較低濃度下對第9天HepG2.CW細(xì)胞上清中抗原的分泌也具有一定的抑制作用,且化合物CL042抑制效果最好;另外,化合物CL005和CL042能夠顯著地抑制HepG2.CW細(xì)胞上清中HBV DNA的拷貝數(shù),在濃度為1μM時,對第9天細(xì)胞上清中HBV DNA的抑制率均為98.60%,抑制效果隨著樣品濃度的增大而增強(qiáng)。(2)通過對CL049~

6、CL060這12個化合物細(xì)胞毒性研究,發(fā)現(xiàn)CL051、CL052、CL053、CL055、CL058、CL059和CL060細(xì)胞毒性較低,CC50均大于1000μM;同時,化合物CL060對第9天細(xì)胞上清中抗原的分泌具有良好的抑制作用,在濃度為5μM對,化合物CL060對HBeAg的抑制率為22.10%,對HBsAg的抑制率為26.67%,且抑制作用與樣品濃度之間呈正相關(guān)。[結(jié)論]通過對54個化合物的初步研究,篩選出9個細(xì)胞毒性相對較低

7、的化合物,其中化合物CL005、CL042和CL060能夠顯著地抑制乙肝病毒HBeAg、HBsAg的分泌,且樣品CL005和CL042對HepG2.CW細(xì)胞上清中HBV DNA的復(fù)制也具有顯著的抑制效果,顯示出良好的體外抗HBV活性,值得做進(jìn)一步的研究。
  第二部分:核苷-聯(lián)苯雙酯化合物α-DDB-FNC體外抗耐藥HBV活性的評價。[目的]化合物α-DDB-FNC,前期的實驗研究已經(jīng)表明該化合物體內(nèi)外均具有良好的抗HBV活性。本

8、次實驗主要是針對化合物α-DDB-FNC抗耐藥HBV的體外抑制作用進(jìn)行研究。[方法]實驗采用能夠合成和分泌乙肝標(biāo)志性抗原和病毒顆粒的拉米夫定耐藥型 HBV細(xì)胞株 HepG2.211以及對拉米夫定和恩替卡韋雙重耐藥的HepG2.LER細(xì)胞株為實驗?zāi)P?。采?MTT法檢測化合物α-DDB-FNC對兩種細(xì)胞的毒性作用;ELISA法檢測樣品作用后對細(xì)胞上清中 HBsAg和HBeAg表達(dá)的影響;FQ-PCR法檢測樣品對細(xì)胞上清和細(xì)胞內(nèi)HBV DN

9、A復(fù)制的影響,以此評價化合物α-DDB-FNC抗耐藥 HBV活性。[結(jié)果]化合物α-DDB-FNC作用9天,結(jié)果顯示α-DDB-FNC對兩種耐藥細(xì)胞產(chǎn)生的毒性具有一定的差異,對HepG2.211細(xì)胞具有較大的毒性,對HepG2.LER細(xì)胞毒性相對較低;對兩種細(xì)胞上清中抗原的分泌均具有一定的抑制效果,且抑制作用具有時間和濃度依賴效應(yīng),同時對兩種細(xì)胞HBV DNA復(fù)制的抑制作用也呈現(xiàn)出濃度依賴性。濃度為10μM時,化合物α-DDB-FNC對

10、第9天HepG2.211細(xì)胞上清中 HBeAg和細(xì)胞內(nèi) HBV DNA的抑制率分別為33.48%和72.70%,對HepG2.211細(xì)胞內(nèi)HBV DNA的半數(shù)抑制濃度(IC50)為5.39μM;對HepG2.LER細(xì)胞上清HBsAg和HBeAg的抑制率分別為34.27%和25.83%,對HepG2.LER細(xì)胞內(nèi)外HBV DNA的抑制率分別為95.44%和81.88%,半數(shù)抑制濃度分別為3.02μM和1.60μM。[結(jié)論]化合物α-DDB

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