基于“異類相制”的清絡(luò)通痹復方配伍減輕雷公藤雌性生殖毒性的機制研究.pdf

1、目的:觀察清絡(luò)通痹復方配伍是否能減輕雷公藤雌性生殖毒性并探討其可能的減毒機制，為雷公藤的臨床合理應(yīng)用提供科學依據(jù)，并印證“異類相制”減毒理論的科學性。
　　方法:體內(nèi)研究將SD大鼠隨機分為空白對照組、雷公藤單藥組、雷公藤復方組、雷公藤配伍生地組、雷公藤配伍青風藤組、雷公藤配伍僵蠶組、雷公藤配伍三七組、復方去生地組、復方去青風藤組、復方去僵蠶組、復方去三七組，空白對照組給予同體積的溶媒溶液。連續(xù)灌胃給藥四周，觀察大鼠一般情況及體重增

2、長情況，ELISA法檢測血清卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌激素(E2)含量;光鏡下觀察大鼠卵巢、子宮組織切片，透射電鏡下觀察大鼠卵巢細胞形態(tài)及亞細胞結(jié)構(gòu)。體外研究建立卵巢顆粒細胞培養(yǎng)體系，分不同劑量和不同作用時間加入雷公藤甲素，明確其IC50; MTT法觀察清絡(luò)通痹藥效組分配伍雷公藤甲素后各組對卵巢顆粒細胞增殖抑制率的影響;流式細胞儀檢測各組凋亡情況;采用ELISA方法檢測雷公藤組分配伍對卵巢顆粒細胞分泌雌激素(E2)、孕

3、酮(P)的影響;基因芯片分析雷公藤及復方配伍對大鼠基因表達及各信號通路調(diào)節(jié)的影響。
　　結(jié)果:體內(nèi)實驗結(jié)果表明，連續(xù)灌胃給藥四周后和空白對照組比較，雷公藤單藥組大鼠體重顯著下降(P＜0.01)，大鼠血清FSH、LH水平有所升高(P＜0.05)，血清E2水平有所下降(P＜0.05);復方組與雷公藤單藥組相比大鼠體重顯著升高(P＜0.01)，血清FSH、LH水平有所下降(P＜0.05)，血清E2水平顯著升高(P＜0.01);其余配伍組

4、與雷公藤單藥組相比大鼠體重水平及血清激素水平均有不同程度改善，以雷公藤+生地組、雷公藤+三七組效果最好。病理組織切片結(jié)果顯示，雷公藤單藥組大鼠子宮內(nèi)膜明顯變薄，卵巢總卵泡數(shù)、生長卵泡數(shù)、黃體數(shù)與空白組比較均呈降低趨勢。復方組則未出現(xiàn)病理性改變，雷公藤+生地組和雷公藤+三七組未出現(xiàn)明顯病理性改變，雷公藤+青風藤組和雷公藤+僵蠶組病理損害較雷公藤單藥組稍輕。卵巢組織透射電鏡結(jié)果顯示，雷公藤單藥組卵巢細胞可見亞細胞結(jié)構(gòu)損傷，復方組損傷較小。體

5、外研究發(fā)現(xiàn)雷公藤主要效毒成分雷公藤甲素可抑制卵巢顆粒細胞增殖，并導致其凋亡，而清絡(luò)通痹復方主要組分中梓醇和三七總皂苷可減輕雷公藤甲素對卵巢顆粒細胞的傷害并降低其凋亡率。此外，雷公藤甲素還可顯著減少卵巢顆粒細胞分泌E2、P含量(P＜0.01)，配伍復方中其他藥物組分后卵巢顆粒細胞分泌E2、P含量均有不同程度升高?；蛐酒Y(jié)果顯示，雷公藤甲素可下調(diào)PI3K-Akt signaling pathway、GnRH signaling pathw

6、ay、Steroid hormone biosynthesis等信號通路及其相關(guān)基因的表達，而復方可上調(diào)上述信號通路及相關(guān)基因。
　　結(jié)論:通過雷公藤雌性生殖毒性體內(nèi)和體外的研究，探討雷公藤所致雌性生殖毒性可能是因為干擾下丘腦-垂體-卵巢軸的功能，影響卵泡發(fā)育、子宮內(nèi)膜增殖相關(guān)的激素水平，從而打破生殖軸的穩(wěn)態(tài)所導致的;促使卵巢顆粒細胞的凋亡并干擾其分泌功能可能是雷公藤的雌性生殖毒性的另一機制。而雷公藤復方通過與不同功效藥物配伍可以