葉酸修飾的和厚樸酚主動(dòng)靶向藥物對(duì)鼻咽癌的抑制作用與機(jī)制研究.pdf

1、目的：制備并驗(yàn)證葉酸修飾的靶向人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞的和厚樸酚的納米藥物系統(tǒng)，并探討其對(duì)鼻咽癌抑制效果和機(jī)制。
　　方法：本文使用兩親性三嵌段聚合物：聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚己內(nèi)酯（PCL-PEG-PCL,PCEC）為原材料，采用聚醚酰亞胺（PEI）引入胺基后，與葉酸（Folate, FA）共價(jià)結(jié)合，制備了目標(biāo)載體聚合物PCEC-PEI-FA。然后，以PCEC-PEI-FA聚合物為載體材料，通過薄膜分散法自主裝負(fù)載和厚樸酚形成具有主

2、動(dòng)靶向功能的載藥納米粒（ATNH），并使用透射電鏡、激光粒度儀、紅外光譜儀及核磁氫譜考察納米聚合物的形貌、粒徑及結(jié)構(gòu)，溶血實(shí)驗(yàn)考察溶血安全性、透析法考察體外釋藥特性。使用噻唑藍(lán)（methylthiazoletetrazolium，-MTT）試驗(yàn)及熒光顯微鏡分別研究了該納米粒的細(xì)胞毒性和主動(dòng)靶向作用。建立人鼻咽癌裸鼠體內(nèi)皮下移植瘤模型，并接受主動(dòng)靶向納米粒的治療。腫瘤再生長(zhǎng)延遲時(shí)間曲線和中位生存期用于評(píng)價(jià)載藥納米粒的抗腫瘤療效。18F-脫

3、氧葡萄糖（fluorine-18-deoxyglucose, FDG） PET/CT顯像用于評(píng)價(jià)腫瘤對(duì)載藥納米粒的早期反應(yīng)。此外，載藥納米粒的抗腫瘤機(jī)制研究是通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布與細(xì)胞凋亡和免疫組化檢測(cè)血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子（CD31）反應(yīng)抗血管生成作用及增殖細(xì)胞核抗原（Ki67）反應(yīng)抗增殖作用。
　　結(jié)果：該研究制備的主動(dòng)靶向功能的和厚樸酚納米粒（ATNH）呈球形，平均流體動(dòng)力學(xué)直徑為188.34±0.54 nm,無

4、明顯的突發(fā)釋放，并呈現(xiàn)出緩慢釋藥的特點(diǎn)，未發(fā)生溶血現(xiàn)象。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：主動(dòng)靶向載藥納米粒（ATNH）對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性明顯高于普通和厚樸酚，其作用機(jī)制可能與葉酸受體（folate receptor, FR）介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用有關(guān)。主動(dòng)靶向載藥納米（ATNH）組的細(xì)胞凋亡指數(shù)為86.07±4.95％，明顯高于各對(duì)照組（P＜0.01）.體內(nèi)研究結(jié)果表明，主動(dòng)靶向載藥納米粒（ATHN）組的腫瘤延遲生長(zhǎng)時(shí)間及中位生存時(shí)間分別為24天及5

5、7.5天，明顯高于普通和厚樸酚對(duì)照組（腫瘤延遲生長(zhǎng)時(shí)間及中位生存時(shí)間分別為8天及34天）及非主動(dòng)靶向納米組（腫瘤延遲生長(zhǎng)時(shí)間及中位生存時(shí)間分別為18天及42.5天（P＜0.01）。小動(dòng)物PET/CT顯像結(jié)果示主動(dòng)靶向載藥納米粒（ATHN）組的T/M值為1.03±0.42(P＜0.01)。免疫組化結(jié)果顯示：主動(dòng)靶向載藥納米粒（ATHN）組的Ki67陽性指數(shù)為37.24±3.89%(P＜0.01)，CD31陽性指數(shù)為2.16±0.76(P＜

6、0.01)。與對(duì)照組相比，主動(dòng)靶向載藥納米粒（ATHN）組在G1期的細(xì)胞比例升高，為51.24±3.95%，明顯高于對(duì)照組（p＜0.01）。
　　結(jié)論：葉酸修飾的和厚樸酚納米粒具有對(duì)鼻咽癌細(xì)胞（HNE-1）的主動(dòng)特異性靶向功能，對(duì)鼻咽癌移植瘤具有非常明顯的抗腫瘤作用。其抗癌機(jī)制可能與誘導(dǎo)人鼻咽癌細(xì)胞凋亡，G1期細(xì)胞周期阻滯，抑制腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤血管生成，并抑制腫瘤代謝有關(guān)。表明該載藥納米粒對(duì)于治療鼻咽癌等細(xì)胞表面葉酸受體表達(dá)豐富