HSP90、SIRT3基因多態(tài)性與肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及其在肝癌中表達(dá)與侵襲間的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　本課題通過研究HSP90和SIRT3在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)與侵襲以及兩者的多態(tài)性位點(diǎn)與肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的相關(guān)性，旨在探討HSP90與SIRT3二者對(duì)肝癌發(fā)生發(fā)展的影響，并通過此項(xiàng)群體研究發(fā)現(xiàn)和鑒定新的肝細(xì)胞癌易感基因，試圖為肝癌易感人群的疾病預(yù)防提供新的標(biāo)志物，同時(shí)也為開發(fā)和研制新的肝細(xì)胞癌臨床用藥提供新的靶標(biāo)，以期對(duì)提高肝細(xì)胞癌的臨床防治效果提供幫助。
　　方法：
　　（1）選取在2013年1月-2015年1

2、0月期間住院的198例肝癌患者，年齡在35-76歲范圍；同時(shí)采集198例體檢中心健康自愿者作為對(duì)照，年齡在33-69歲間。所有受試者均基于自愿并簽署知情同意書。對(duì)HSP90與SIRT3基因多態(tài)性與肝癌患病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行相關(guān)性分析，此外還對(duì)具有飲酒史患者與肝癌易感性進(jìn)行相關(guān)性分析。（2）將pGCSIL-GFP-HSP90重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染人肝癌AMMC-7721細(xì)胞，熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HSP90 mRNA的表達(dá)；MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)

3、情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后對(duì)各組細(xì)胞凋亡的影響；Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力；Caspase-3活性檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。
　?。?）采用RNA干擾的方法沉默人肝癌細(xì)胞AMMC-7721中HSP90基因的表達(dá)獲得HSP90基因沉默細(xì)胞株siHSP90-AMMC-7721，分別將野生型WT-HSP90和突變型Mut-HSP90轉(zhuǎn)染siHSP90-AMMC

4、-7721細(xì)胞；熒光定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞SIRT3 mRNA表達(dá)；western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞SIRT3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）HSP90 rs8005905與rs3742429基因多態(tài)性與肝癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間存在顯著相關(guān)性；HSP90 rs3742429與具有飲酒史的人群的肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈顯著相關(guān)性。
　?。?）上調(diào)AMMC-7721細(xì)胞中HSP90的表達(dá)后使細(xì)胞的增殖能力明顯增高；流式細(xì)胞儀檢測(cè)

5、結(jié)果表明，上調(diào)細(xì)胞中HSP90的表達(dá)后對(duì)AMMC-7721細(xì)胞凋亡情況并未見顯著影響；通過Transwell小室法檢測(cè)結(jié)果表明上調(diào)HSP90的表達(dá)后視野平均侵襲細(xì)胞數(shù)量顯著增多；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明增高AMMC-7721細(xì)胞中HSP90的表達(dá)時(shí)，細(xì)胞克隆的形成能力明顯上升；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)表明上調(diào)HSP90后AMMC-7721細(xì)胞的遷移性明顯增強(qiáng)； caspase-3活性檢測(cè)結(jié)果表明，上調(diào)HSP90表達(dá)后AMMC-7721細(xì)胞中ca

6、spase-3活性并未受到顯著影響。
　　(3)用熒光定量PCR以及western blot法分別對(duì)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中SIRT3蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明野生型HSP90轉(zhuǎn)染后siHSP90-AMMC-772細(xì)胞中SIRT3 mRNA和相應(yīng)蛋白的表達(dá)明顯降低；突變型HSP90轉(zhuǎn)染后siHSP90-AMMC-7721細(xì)胞中SIRT3 mRNA和相應(yīng)蛋白的表達(dá)無明顯變化。
　　結(jié)論：
　　HSP90基因多態(tài)性以及患者是