磁共振成像動(dòng)態(tài)觀察重組MANF蛋白在大鼠缺血再灌注損傷中的治療作用.pdf

1、目的：應(yīng)用磁共振成像（MRI）技術(shù)動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)重組 MANF(中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的神經(jīng)因子)蛋白對(duì)大鼠缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
　　方法：利用實(shí)驗(yàn)室 pET28a-MANF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染好的 E. coli BL21菌株誘導(dǎo)表達(dá)MANF蛋白，經(jīng) BCA蛋白測(cè)定法測(cè)出蛋白濃度。利用大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞法建立局灶性腦缺血再灌注損傷模型（MCAO），經(jīng)磁共振掃描證實(shí)有明顯的腦缺血損傷癥狀后，經(jīng)尾靜脈和側(cè)腦室注射兩種方式將適宜劑量的重組MANF蛋

2、白注入大鼠體內(nèi)，同時(shí)靜脈注射依達(dá)拉豐（3 mg/kg）作為陽(yáng)性對(duì)照組。在給藥后的第1天、第2天、第3天、第5天及第7天對(duì)各實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行利用磁共振掃描，同時(shí)結(jié)合死亡率統(tǒng)計(jì)、體重評(píng)估、神經(jīng)功能評(píng)分和梗死體積的變化評(píng)價(jià)重組 MANF蛋白對(duì)腦缺血再灌注損傷的治療效果。用 MRIcro2.0對(duì) MRI掃描結(jié)果進(jìn)行梗死體積和梗死側(cè)/正常側(cè)信號(hào)強(qiáng)度的統(tǒng)計(jì)；用Image J對(duì)TTC染色結(jié)果進(jìn)行梗死體積統(tǒng)計(jì)；將所得結(jié)果應(yīng)用SPASS16.0軟件分析是否

3、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果： MRI和神經(jīng)功能評(píng)分篩選出成功的腦缺血模型，在 T2WI圖像上觀察到大鼠缺血側(cè)腦實(shí)質(zhì)皮層及基底節(jié)區(qū)出現(xiàn)片狀高信號(hào)區(qū)；同時(shí)大鼠神經(jīng)功能評(píng)分為3分，不能伸展對(duì)側(cè)前肢，并向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈。在腦缺血再灌注后經(jīng) MR連續(xù)掃描發(fā)現(xiàn)，再灌注3h后大鼠梗塞灶的信號(hào)強(qiáng)度比值和再灌注0h相比具有顯著性差異，表明腦部出現(xiàn)早期損傷。然后將純化好的重組MANF蛋白經(jīng)尾靜脈和側(cè)腦室注射兩種方式注入大鼠體內(nèi)，同時(shí)注射 PBS組作為陰性對(duì)照

4、組，注射依達(dá)拉豐（3 mg/kg）作為陽(yáng)性對(duì)照組。在注射藥物后的第1天、第2天、第3天、第5天及第7天，利用 MRI來(lái)評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)組治療腦缺血再灌注損傷的療效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，第三天大鼠側(cè)腦室注射組腦梗死體積（45.31±21.13）小于尾靜脈注射組（97.86±8.64），經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)P<0.05；側(cè)腦室注射10μg及20μg MANF蛋白治療組與 PBS治療組比較，有效減輕了大鼠腦缺血再灌注損傷，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；同時(shí)20μg MANF蛋

5、白治療組的腦缺血保護(hù)作用優(yōu)于10μg組。除此之外，在缺血再灌注損傷早期經(jīng)側(cè)腦室注入MANF蛋白相比對(duì)照組可以有效降低大鼠死亡率，促進(jìn)大鼠體重增長(zhǎng)，提高神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分。基于 MRI和 TTC染色兩種方法統(tǒng)計(jì)的梗死體積都表明側(cè)腦室注射MANF組在給藥后第7天梗死體積相比對(duì)照組及明顯減少。對(duì)神經(jīng)元的免疫組化染色分析結(jié)果表明，側(cè)腦室注射MANF組神經(jīng)元存活率明顯高于對(duì)照組。
　　結(jié)論：MANF蛋白對(duì)大鼠缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，可以有效