Let--7c-5p在乳腺癌中的表達、功能及其分子機制的研究.pdf

1、乳腺癌是女性最普遍的惡性疾病之一，它的高發(fā)生率及死亡率嚴重威脅女性身心健康。隨著精準醫(yī)療的提出，乳腺癌的治療方法將更加多樣化，治療效果也將更加令人滿意。在精準醫(yī)療中基因工程將發(fā)揮重要作用，所以探究基因在乳腺癌中扮演的角色以及其發(fā)揮作用的分子機制能夠為精準醫(yī)療奠定理論基礎。Let-7c-5p是抑癌基因let-7家族中的一員，它在前列腺癌、非小細胞肺癌以及結腸癌中都起著一定的抑癌作用，在乳腺癌患者血清中檢測到其表達量呈明顯下降趨勢，但是le

2、t-7c-5p在乳腺癌中的生物學功能尚未明了。
　　本研究選取9對乳腺癌以及相對應癌旁組織的石蠟包埋樣本為實驗對象，提取其總RNA后，進行RT-qPCR檢測let-7c-5p在乳腺癌及癌旁組織中的表達情況;同時在乳腺癌細胞MCF-7中過表達let-7c-5p，采用MTT的方法測試let-7c-5p對MCF-7細胞增殖能力的影響，利用流式細胞儀探測let-7c-5p對MCF-7細胞凋亡的影響;然后利用生物信息學軟件預測let-7c-

3、5p潛在的靶標基因，并用雙熒光素酶實驗加以驗證，再采用熒光定量PCR和Western blotting實驗深入探索其調控方式。結果顯示，let-7c-5p在9例乳腺癌組織中的表達量均低于對應的癌旁組織，其在癌組織中的表達量約為癌旁組織的0.23。對乳腺癌細胞MCF-7轉染let-7c-5pmimics后，細胞中l(wèi)et-7c-5p表達量較對照組顯著升高(P＜0.01)，轉染后細胞的增殖能力受到明顯抑制(P＜0.01)，且抑制效果與let-

4、7c-5p mimics終濃度呈正相關;流式細胞儀檢測結果表明過表達let-7c-5p后細胞凋亡率明顯上升(P＜0.01)。生物信息學軟件預測ERCC6為let-7c-5p潛在的靶標基因，雙熒光素酶實驗、Western blotting和熒光定量PCR結果表明let-7c-5p能夠結合至ERCC6 mRNA的3'UTR，從而抑制ERCC6蛋白的合成，但是ERCC6 mRNA的表達水平并不受let-7c-5p影響。綜上，本研究結果表明le