LeHSP84在番茄中的反義表達(dá).pdf

1、熱激蛋白90是一種常見的分子伴侶，也是非應(yīng)激狀態(tài)下細(xì)胞中含量最豐富的蛋白之一，它廣泛存在于細(xì)菌和真核生物細(xì)胞中，但古細(xì)菌細(xì)胞中不存在。真核生物細(xì)胞質(zhì)HSP90對細(xì)胞各種條件下的生存都是必不可少的，而細(xì)菌的HSP90同系物HTPG只在應(yīng)激狀態(tài)下發(fā)揮作用。HSP90家族在體內(nèi)多為二聚體，由三個功能結(jié)構(gòu)域組成：N-末端能夠結(jié)合ATP，C-末端能夠促進(jìn)二聚化并結(jié)合多種輔助伴侶分子，中間鏈接區(qū)具有ATPase活性且能夠結(jié)合各種客戶蛋白。單體的HS

2、P90不具備生物活性功能。 雖然HSP90發(fā)現(xiàn)的比較早，但是對它的研究主要集中在動物中，而對植物中HSP90的功能方面的研究較少。擬南芥中HSP90有7個成員，其中AtHSP90-1、AtHSP90-2、AtHSP90-3和AtHSP90-4組成細(xì)胞質(zhì)亞族，AtHSP90-5、AtHSP90-6、AtHSP90-7分別位于葉綠體、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。最近研究表明HSP90分子伴侶復(fù)合物在植物發(fā)育和對外部刺激應(yīng)答中非常重要，尤其是在抗

3、性(resistance R)蛋白介導(dǎo)的抵抗病毒侵入的過程中起重要作用。 從番茄cDNA文庫中克隆到的LeHSP84位于染色體中，全長2588bp，表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)中。序列分析證明LeHSP84是HSP90家族的一員。為了了解HSP84在植物抵抗逆境過程中的功能，本實驗利用反義技術(shù)，抑制LeHSP84基因在番茄中的表達(dá)。結(jié)果表明，抑制LeHSP84基因表達(dá)后番茄的耐受熱和鹽脅迫的能力較對照并無明顯差異。本論文主要結(jié)果如下：

4、 1)轉(zhuǎn)基因植株的獲得：PCR和Southern blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)LeHSP84基因反義片段的番茄葉片DNA，用NPTII引物能擴增和雜交出特異DNA片段，而對照番茄未見特異條帶，說明LeHSP84反義片段確實已導(dǎo)入番茄中。Northern blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因番茄常溫下HSP84表達(dá)量要低于對照，說明反義技術(shù)已經(jīng)抑制了LeHSP84基因在植物體內(nèi)的表達(dá)。 2)番茄耐熱性：將對照及轉(zhuǎn)基因番茄植株分別置于40℃、42℃、

5、44℃和46℃下熱激處理2h，28℃恢復(fù)四周，觀察發(fā)現(xiàn)40℃、42℃、44℃處理后很快植株就恢復(fù)，且轉(zhuǎn)反義基因番茄生長狀況與對照番茄并無明顯差異。46℃處理后恢復(fù)較慢，三周后逐漸恢復(fù)，轉(zhuǎn)反義基因番茄生長狀況與對照番茄并無明顯差異，轉(zhuǎn)基因番茄株系的Fv/Fm下降程度略小于對照番茄植株，而葉綠素含量變化無明顯差異。 3)番茄抗鹽性：用200 mmol/L，的NaCl溶液對轉(zhuǎn)基因植株和對照植株進(jìn)行脅迫處理，植物生長均受到明顯抑制，部分