2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、蒽醌類化合物主要存在于虎杖、大黃、蘆薈等多種中草藥中,具有抗菌、降血壓、抗氧化、抗腫瘤等多種生物活性,有的藥物已應(yīng)用于臨床。天然的蒽醌類化合物存在含量低,提取困難、難分離,有心臟毒性等缺點。因此,結(jié)合抗腫瘤藥物的作用原理和機制以及蒽醌類衍生物的構(gòu)效關(guān)系,合成高效低毒的衍生物是目前開發(fā)新藥的重要途徑。本課題組前期設(shè)計合成了7種具有酰胺鍵的蒽醌類衍生物,并通過MTT法檢測這7種蒽醌衍生物對8種腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制作用,結(jié)果顯示:取代基團為甘

2、氨酸,亮氨酸,脯氨酸,纈氨酸,苯丙氨酸這5種化合物可以明顯的抑制食管癌細(xì)胞株EC9706、膽管癌細(xì)胞株QBC-939、肝癌細(xì)胞株HepG2、胃癌細(xì)胞株SGC-7901、結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116等腫瘤細(xì)胞的增殖,其中取代基團為亮氨酸和纈氨酸的蒽醌衍生物(分別標(biāo)記為:C2和C3)對HCT116細(xì)胞增殖的抑制率最明顯。本文主要探究了C2、C3對人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞的作用及其機制,研究內(nèi)容如下:
  1、為了檢測C2和C3與生物大分子

3、相互作用,通過紫外光譜、熒光光譜、圓二色譜等方法檢測了 C2和 C3與牛血清白蛋白(BSA)和小牛胸腺DNA(CT-DNA)的相互作用,實驗結(jié)果表明:兩種衍生物能與BSA相結(jié)合,使其內(nèi)源熒光發(fā)生靜態(tài)猝滅,并且破壞了BSA的α-螺旋結(jié)構(gòu);通過嵌插作用與DNA相互作用,減弱了其堿基間的相互作用。C2和C3與BSA和DNA相互作用顯著,這為進(jìn)一步檢測C2和C3的抗癌活性奠定了理論基礎(chǔ)。
  2、采用MTT法檢測C2和C3對人結(jié)腸癌HCT

4、116細(xì)胞增殖的抑制作用,呈劑量和時間依賴性。分別采用不同濃度的兩種衍生物作用HCT116細(xì)胞,用普通倒置顯微鏡觀察作用24 h后,細(xì)胞形態(tài)的變化,發(fā)現(xiàn)隨著衍生物濃度的增大,細(xì)胞發(fā)生顯著皺縮變圓且細(xì)胞間距增大;用DAPI染色法觀察細(xì)胞核形態(tài)的變化,可見細(xì)胞核固縮,細(xì)胞核呈現(xiàn)大小和形態(tài)不同的現(xiàn)象。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測兩種衍生物對HCT116細(xì)胞凋亡和周期的影響,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期被阻滯,出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象,但是凋亡現(xiàn)象不十分明顯,猜測衍生物可能誘導(dǎo)細(xì)胞

5、發(fā)生自噬。通過MDC染色和GFP-LC3定位檢測,發(fā)現(xiàn)兩種衍生物能顯著誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞發(fā)生自噬。兩種化合物結(jié)構(gòu)相似,作用機理相同,以C3對細(xì)胞的作用為例,檢測了一定濃度C3作用細(xì)胞后,隨著作用時間的變化,凋亡相關(guān)蛋白 Cleaved PARP、Cleaved caspase9、Cleaved caspase3、p-Bcl-2、p-Bcl-xL、Bax以及Bcl-2、Bcl-xL的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)凋亡相關(guān)蛋白Cleaved PARP

6、、Cleaved caspase9、Cleaved caspase3、p-Bcl-2、p-Bcl-xL、Bax表達(dá)量明顯增多,而Bcl-2、Bcl-xL的表達(dá)量顯著降低,由此表明C3能顯著誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞發(fā)生凋亡;并且自噬相關(guān)蛋白P62的表達(dá)量顯著降低,LC3II、 Beclin-1表達(dá)量明顯升高,可知 C3也能顯著誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞發(fā)生自噬。
  3、為了進(jìn)一步檢測 C3誘導(dǎo) HCT116細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡的機理,通過流式

7、細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度C3作用于HCT116細(xì)胞后,ROS水平的變化。結(jié)果顯示,隨C3濃度的升高,ROS水平顯著增高;當(dāng)使用ROS的特異抑制劑NAC和C3共同作用后,與單獨C3作用相比,ROS水平顯著降低。用相同濃度的C3處理HCT116細(xì)胞后,采用Western Blot技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)p-JNK1和p-JNK2蛋白的表達(dá)量升高且呈時間依賴性。當(dāng)NAC抑制ROS后,p-JNK1和p-JNK2蛋白表達(dá)量顯著降低。因此,C3誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞發(fā)

8、生自噬和凋亡,很可能是通過ROS-JNK信號通路。當(dāng)用JNK磷酸化的特異性抑制劑SP500125和C3共同作用HCT116細(xì)胞后,與單獨C3作用相比,Western Blot技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)Cleaved caspase9、Cleaved caspase3、LC3I和LC3II、Beclin-1的表達(dá)量顯著降低;經(jīng)MTT檢測后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞活力顯著升高。JNK1/2 siRNA干擾后其結(jié)果一致,可見C3可能是通過ROS-JNK信號通路誘導(dǎo)HCT

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