LRP16基因體外調(diào)控脂聯(lián)素和胰島素抵抗的作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　觀察LRP16基因?qū)χ?lián)素、胰島素信號(hào)通路的影響，體外探討脂聯(lián)素信號(hào)通路參與LRP16調(diào)控胰島素抵抗的可能機(jī)制。
　　方法:
　　慢病毒構(gòu)建并鑒定四組LRP16基因的HepG2穩(wěn)定細(xì)胞系:過(guò)表達(dá)、過(guò)表達(dá)對(duì)照、抑制表達(dá)及抑制表達(dá)對(duì)照。對(duì)以上四組細(xì)胞系分別予以PBS、胰島素(100nM，30min)、脂聯(lián)素(2μg/ml，15min)、脂聯(lián)素預(yù)處理后加胰島素（脂聯(lián)素2μg/ml，15min后加胰島素100nM，

2、30min）的不同處理，分別用比色法觀察細(xì)胞葡萄糖攝取率變化、酶法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和膽固醇含量、Q-PCR觀察糖脂代謝酶Fatp2等的表達(dá)、Western blot檢測(cè)PI3K和AMPK信號(hào)通路磷酸化及蛋白表達(dá)，檢測(cè)各組在胰島素刺激下及有或無(wú)脂聯(lián)素預(yù)處理下的脂聯(lián)素、胰島素信號(hào)通路變化差別。采集LRP16過(guò)表達(dá)和對(duì)照細(xì)胞對(duì)應(yīng)8個(gè)處理組的RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析。
　　結(jié)果:
　　1、LRP16過(guò)表達(dá)明顯抑制了HepG2細(xì)胞在胰島

3、素和脂聯(lián)素刺激下的葡萄糖攝取，上調(diào)pIRS-1(Ser307)蛋白表達(dá)和下調(diào)PI3-K(p85)、pAKT(Ser473)蛋白表達(dá);抑制LRP16促進(jìn)HepG2細(xì)胞在胰島素和脂聯(lián)素刺激下的葡萄糖攝取，下調(diào)pIRS-1(Ser307)蛋白表達(dá)和上調(diào)PI3-K(p85)、pAKT(Ser473)蛋白表達(dá)。
　　2、LRP16過(guò)表達(dá)下調(diào)HepG2細(xì)胞在脂聯(lián)素刺激下細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和膽固醇含量，減弱脂聯(lián)素對(duì)Fatp2、Fatp5、ACC、A

4、cs15基因mRNA下調(diào)作用，同時(shí)下調(diào)pAMPKα(Thr172)蛋白表達(dá);抑制LRP16上調(diào)HepG2細(xì)胞在脂聯(lián)素刺激下細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和膽固醇含量，增強(qiáng)脂聯(lián)素對(duì)Fatp2、Fatp5、ACC、Acs15基因mRNA下調(diào)作用，同時(shí)上調(diào)pAMPKα(Thr172)蛋白表達(dá)。
　　3、轉(zhuǎn)錄組分析，基因差異表達(dá)分析顯示LRP16過(guò)表達(dá)能同時(shí)下調(diào)胰島素信號(hào)通路中INSR、IRS、 PI3K、 GLUT4等蛋白和脂聯(lián)素信號(hào)通路中的Adipo