2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究目的:通過(guò)大鼠血清建立干細(xì)胞移植治療肝衰竭體外模型,進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)。觀(guān)測(cè)在肝衰竭環(huán)境中間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖、分化及免疫調(diào)節(jié)情況,以及在肝衰竭環(huán)境中清熱解毒涼血化瘀法對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的影響。進(jìn)一步從細(xì)胞層面探索在肝衰竭環(huán)境中清熱解毒涼血化瘀法與間充質(zhì)干細(xì)胞的協(xié)同作用。
  研究方法:
  1、大鼠BMSCs分離、培養(yǎng)及傳代篩選:從3-4周齡SPF級(jí)SD大鼠骨髓中提取、分離、培養(yǎng)BMSCs。運(yùn)用全骨髓培養(yǎng)法及傳代篩選法

2、進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)及純化。當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到80~90%時(shí),進(jìn)行傳代、擴(kuò)增。細(xì)胞傳代到第3代時(shí)用于進(jìn)一步的檢測(cè)及移植。通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及流式細(xì)胞儀鑒定證明實(shí)驗(yàn)所得細(xì)胞為BMSCs。
  2、實(shí)驗(yàn)血清的制備:將30只大鼠分為模型組及健康組,模型組21只大鼠通過(guò)腹腔注射D-GalN制造肝衰竭大鼠模型。48h后隨機(jī)從模型組和健康組各抽取大鼠3只,采集肝組織進(jìn)行病理切片,驗(yàn)證造模成功。再將模型大鼠14只平均分為中藥干預(yù)組和肝衰竭組,中藥干預(yù)組予以肝毒

3、清顆粒灌胃,肝衰竭組和健康組予以等劑量生理鹽水灌胃。3組大鼠灌胃3天后,腹主動(dòng)脈采血并分離血清,過(guò)濾除菌,制備成中藥干預(yù)血清、肝衰竭血清、健康血清,置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>  3、建立肝衰竭模擬環(huán)境下骨髓間充質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系,采集并檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)
  將第3代BMSCs接種于96孔板、6孔板及24孔板中,各設(shè)立3個(gè)實(shí)驗(yàn)組,分別加入健康血清、肝衰竭血清、中藥干預(yù)血清進(jìn)行BMSCs培養(yǎng)。
  96孔板中培養(yǎng)BMSCs,每組

4、設(shè)3個(gè)復(fù)孔,分別在培養(yǎng)1d,2d,3d時(shí)終止培養(yǎng),進(jìn)行CCK-8檢測(cè),使用酶標(biāo)儀檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行定量分析。觀(guān)察BMSCs的增殖存活情況。
  24孔板中培養(yǎng)BMSCs,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,做爬片處理,培養(yǎng)10d后,終止培養(yǎng),并制作CK18免疫熒光爬片。通過(guò)免疫熒光顯微鏡檢測(cè)BMSCs肝向分化情況。
  6孔板中培養(yǎng)BMSCs,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,培養(yǎng)10d后,終止培養(yǎng),提取細(xì)胞蛋白,并通過(guò)Western blot法檢測(cè)甲胎蛋白(AFP)

5、、肝組織白蛋白(ALB)、吲哚胺2,3—雙加氧酶(IDO),分析BMSCs肝向分化及免疫調(diào)節(jié)活性。
  研究結(jié)果:
  1、將BMSCs置于各組血清中培養(yǎng)1天、2天時(shí),CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示:健康組、肝衰竭組、中藥干預(yù)組,組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第3天時(shí),CCK-8檢測(cè)結(jié)果示:健康組與肝衰竭組,健康組與中藥干預(yù)組的組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而肝衰竭組與中藥干預(yù)組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但在細(xì)胞培養(yǎng)10天后觀(guān)察發(fā)現(xiàn),中藥干預(yù)組細(xì)胞生長(zhǎng)明

6、顯優(yōu)于肝衰竭組。
  2、BMSCs制作細(xì)胞爬片,培養(yǎng)10天后進(jìn)行CK18免疫熒光檢測(cè)。結(jié)果顯示健康組染色為陰性,肝衰竭組及中藥干預(yù)組染色為陽(yáng)性,后者染色較強(qiáng),但均明顯弱于肝細(xì)胞染色。推測(cè)BMSCs肝向分化過(guò)程中細(xì)胞分化數(shù)量或細(xì)胞成熟度較低。
  3、BMSCs培養(yǎng)10天后通過(guò)Western blot法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。ALB蛋白表達(dá)結(jié)果顯示:健康組、肝衰竭組、中藥干預(yù)組均有表達(dá),且依次遞增,各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但其表達(dá)量

7、較少。AFP蛋白表達(dá)結(jié)果顯示:健康組、肝衰竭組、中藥干預(yù)組表達(dá)強(qiáng)度依次增強(qiáng),各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  4、BMSCs培養(yǎng)10天后通過(guò)Western blot法檢測(cè)IDO表達(dá),結(jié)果顯示:健康組IDO蛋白無(wú)明顯表達(dá)。IDO蛋白在中藥干預(yù)組中的表達(dá)高于肝衰竭組,且兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  研究結(jié)論:
  通過(guò)建立BMSCs移植治療肝衰竭體外模型,觀(guān)察發(fā)現(xiàn)BMSCs在肝衰竭環(huán)境中增殖活性相對(duì)下降,具有肝向分化趨勢(shì),及

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