澳大利亞厚皮海綿(Craniella austrialiensis)共附生鏈霉菌DA11幾丁質(zhì)酶的研究.pdf

1、本研究采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對我國南海澳大利亞厚皮海綿共附生鏈霉菌DA11產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的發(fā)酵培養(yǎng)進(jìn)行了優(yōu)化，并對其產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶進(jìn)行了分離純化及相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)的分析。 ㈠在已有文獻(xiàn)中培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，首先通過單因素法，找到了適合DA11生長、產(chǎn)酶的碳氮源，分別是半乳糖和蛋白胨；第二步通過Plackett–Burman實(shí)驗(yàn)確定了對產(chǎn)酶影響最重要的三個(gè)因素是半乳糖，膠體幾丁質(zhì)和硫酸鎂，第三步采用響應(yīng)曲面法中的Box-Bohnken方法確定了最優(yōu)發(fā)

2、酵培養(yǎng)基的組成為5.00 g/L 半乳糖，2.62 g/L 膠體幾丁質(zhì)，0.10 g/L MgSO4·7H2O，12.5g/L蛋白胨，1.5g/L PO43-（KH2PO4 0.45g/L，K2HPO4 1.05g/L)，12.5g/L 粉末幾丁質(zhì)，0.03 g/L FeSO4和0.03g/L ZnSO4·7H2O。通過優(yōu)化，使放線菌DA11的最大產(chǎn)酶活力達(dá)到1559.2 U/g 細(xì)胞干重（36.43U/mL)，最大細(xì)胞干重是 23.

3、3 g/L，分別是原培養(yǎng)基的39.2倍和2.6倍。 ㈡利用最優(yōu)產(chǎn)酶培養(yǎng)基對菌種進(jìn)行發(fā)酵，然后進(jìn)行分離純化。采用硫酸銨飽和沉淀、膠體幾丁質(zhì)親和以及DEAE-cellulose離子交換柱層析進(jìn)行純化。通過純化，得到了比活力為2.95 Umg-1的幾丁質(zhì)純酶，利用SDS-PAGE得到一個(gè)分子量大約為34kDa的單一條帶。幾丁質(zhì)純酶有抑制黑曲霉和白假絲酵母生長的能力；它的最適酶反應(yīng)溫度、pH、鹽度分別是50 ℃,8.0和45 g‰ ps