TSH改變亞臨床甲減小鼠胸腺中T細(xì)胞發(fā)育及TSH在免疫系統(tǒng)中的作用.pdf

1、研究背景:
　　促甲狀腺素(thyrotropin，TSH)被認(rèn)為僅僅甲狀腺調(diào)節(jié)。然而，新的證據(jù)表明，高血清TSH水平可能存在潛在的有害的影響。高血清TSH水平，是非酒精性脂肪肝病和心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而且往往伴隨著慢性炎癥、胰島素抵抗、氧化應(yīng)激。亞臨床甲狀腺功能減退癥(subclinical hypothyroidism，SCH)，是一種臨床上較為常見的隱匿性疾病，其特點(diǎn)是甲狀腺功能血清學(xué)檢測(cè)表現(xiàn)為促甲狀腺激素水平增高，但

2、游離甲狀腺素水平尚正常，是甲狀腺機(jī)能減退障礙的早期階段。亞甲減癥的發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，并對(duì)健康有潛在的害影響。SCH在成年人中的患病率約為4-10％。
　　胸腺是重要的中樞免疫器官，是T淋巴細(xì)胞離開骨髓后發(fā)育的重要場(chǎng)所。胸腺為T淋巴細(xì)胞的發(fā)育，提供了一個(gè)特定的微環(huán)境，既胸腺微環(huán)境。對(duì)胸腺內(nèi)T細(xì)胞發(fā)育、分化以及成熟的研究，是當(dāng)今免疫學(xué)研究的重要熱門領(lǐng)域。研究表明，T細(xì)胞表達(dá)促甲狀腺激素受體(TSH receptor，TSH-R

3、)，而SCH中胸腺T細(xì)胞發(fā)育的變化尚未完全闡明。
　　研究目的:
　　本實(shí)驗(yàn)旨在闡明亞甲減小鼠模型中，TSH對(duì)胸腺T細(xì)胞發(fā)育的影響，SCH小鼠模型中胸腺的細(xì)胞組成情況以及不同發(fā)育階段的T細(xì)胞凋亡變化。
　　研究方法:
　　1.SCH小鼠模型的構(gòu)建:應(yīng)用甲巰基咪唑喂養(yǎng)小鼠，甲巰基咪唑劑量為0.08mg/kg/d，甲巰基咪唑喂養(yǎng)16周時(shí)，采用I125標(biāo)記放射免疫的方法，檢測(cè)小鼠的血清中游離甲狀腺素(FT4)水平，采取

4、Elisa的方法測(cè)驗(yàn)小鼠血清TSH水平。通過評(píng)估小鼠的血清甲狀腺功能，來構(gòu)建SCH小鼠模型，使其血清檢測(cè)符合SCH診斷標(biāo)準(zhǔn)，既血清TSH水平升高，甲狀腺激素水平無顯著變化的，研究TSH對(duì)T細(xì)胞發(fā)育的影響。2.SCH小鼠胸腺中不同發(fā)育階段T的免疫學(xué)組成分析:應(yīng)用多色彩流式分析的方法檢測(cè)小鼠胸腺中T細(xì)胞不同發(fā)育階段各T細(xì)胞亞群的比例。3.胸腺中不同發(fā)育階段T細(xì)胞凋亡比例的測(cè)定:應(yīng)用凋亡試劑盒檢測(cè)各T細(xì)胞亞群細(xì)胞凋亡的比例。4.小鼠胸腺內(nèi)凋亡

5、相關(guān)蛋白檢測(cè):采取WesternBlot法測(cè)驗(yàn)胸腺p-ERK/ ERK的蛋白水平變化。5.胸腺近期輸出功能檢測(cè):提取小鼠脾臟DNA，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)小鼠脾臟T細(xì)胞DNA中TREC水平。
　　結(jié)果:
　　1.SCH小鼠模型的構(gòu)建:甲巰基咪唑喂養(yǎng)小鼠16周，SCH組小鼠血清FT4測(cè)值與對(duì)照組小鼠相比，無明顯差異性的變化(P＞0.05);SCH模型組血清TSH水平明顯高于對(duì)照組小鼠(P＜0.05)，兩組血清TSH水平差異具有統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)意義。2.SCH小鼠胸腺中不同發(fā)育階段T的免疫學(xué)組成分析:SCH小鼠胸腺重量比對(duì)照組增加18％。胸腺中CD4+和CD8+單陽性(single positive，SP)胸腺細(xì)胞分別增加了38％和44％。3.胸腺中不同發(fā)育階段T細(xì)胞凋亡比例的測(cè)定:通過檢測(cè)凋亡，我們發(fā)現(xiàn)在SCH小鼠胸腺中，Annexin-Ⅴ+細(xì)胞比例減少(p＜0.05)，證明TSH減少SCH小鼠胸腺T細(xì)胞凋亡。4.小鼠胸腺內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白檢測(cè):Western blot結(jié)果顯