體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討StarD10對(duì)HDL代謝的影響.pdf

1、血脂代謝紊亂嚴(yán)重影響中國(guó)人健康。高低密度脂蛋白膽固醇血癥(LDL-C)是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的主要危險(xiǎn)因素。此外，低高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)在中國(guó)人群中也十分常見。已經(jīng)證實(shí)，低HDL-C血癥是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病發(fā)生、發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。先前我們通過(guò)miRNA芯片篩查發(fā)現(xiàn)microRNA-638（miR-638）與HDL-C水平相關(guān)，人群中miR-638的表達(dá)在低HDL-C人群較HDL-C正常人群表達(dá)高。通過(guò)生物信息學(xué)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)（ht

2、tp://www.targetscan.org/），發(fā)現(xiàn)miR-638有潛在與血脂代謝有關(guān)的靶基因Steroidogenic acute regulatoryprotein-related lipid transfer domain10(StarD10)。
　　目的：
　　動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討StarD10與HDL代謝的關(guān)系;探討StarD10對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響;探討StarD10對(duì)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的影響;探討社區(qū)人群血脂水

3、平與動(dòng)脈僵硬度關(guān)系的隨訪研究。
　　方法：
　　第一部分:一、①構(gòu)建腺病毒介導(dǎo)StarD10基因過(guò)表達(dá)載體;②構(gòu)建腺病毒介導(dǎo)StarD10沉默載體;③StarD10過(guò)表達(dá)小鼠模型的建立:模式動(dòng)物隨機(jī)分組，尾靜脈注射腺病毒StarD10過(guò)表達(dá)載體、StarD10沉默載體、腺病毒空載體及PBS緩沖液（每周2次×1周，每周1次×3周，共計(jì)4周）。二、①模式動(dòng)物血漿TG、 TC、HDL-C、LDL-C濃度測(cè)定;②StarD10對(duì)小鼠

4、膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的影響:通過(guò)測(cè)定小鼠血清、肝臟及糞便中3H-膽固醇占經(jīng)腹腔注射3H-膽固醇總量的百分比，評(píng)估活體膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn);③收集小鼠肝臟標(biāo)本，觀察StarD10對(duì)肝臟脂代謝相關(guān)蛋白表達(dá)的影響:提取蛋白質(zhì)，Western-blot檢測(cè)相關(guān)蛋白水平的變化;④收集小鼠主動(dòng)脈標(biāo)本，觀察StarD10基因過(guò)表達(dá)載體對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化程度與性質(zhì)的影響:選取代表性主動(dòng)脈竇截面，H-E染色，定量測(cè)定StarD10表達(dá)載體干預(yù)前后動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的面積;

5、油紅O染色測(cè)量脂質(zhì)沉積情況;免疫組化染色觀察斑塊穩(wěn)定性指標(biāo):CD68+巨噬細(xì)胞分布。
　　第二部分:本課題選取北京地區(qū)蘋果園社區(qū)人群，初次調(diào)查時(shí)間為2007年9月至2009年1月，共計(jì)1680受試者參加，平均年齡為61.30±11.4。2013年2月至9月完成第一次隨訪調(diào)查，共計(jì)1499例受試者參加隨訪（隨訪率89.2％），平均隨訪時(shí)間為4.8年，其中死亡人數(shù)52人。單變量分析:基線血脂水平及隨訪cf-PWV或cr-PWV相關(guān)性。

6、多元線性回歸分析:基線血脂水平及隨訪cf-PWV或cr-PWV相關(guān)性（因變量為:cf-PWV或cr-PWV;自變量為:年齡、性別、是否吸煙、是否有高血壓病、糖尿病、SBP、DBP、BMI、腰臀圍比、TC、TG、HDL-C、LDL-C、eGFR、空腹血糖及餐后2h血糖）。
　　結(jié)果：
　　第一部分:一、①經(jīng)復(fù)核腺病毒包裝StarD10過(guò)表達(dá)載體滴度約為1×1010PFU/ml。②經(jīng)復(fù)核腺病毒包裝StarD10沉默載體滴度約為1

7、×1010PFU/m l。③在28周的高脂高膽固醇喂養(yǎng)及StarD10干預(yù)后，StarD10過(guò)表達(dá)組小鼠與基線組、PBS對(duì)照組、腺病毒對(duì)照組相比較，體重及肝臟重量未表現(xiàn)出明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05;StarD10沉默組小鼠與基線、PBS、腺病毒對(duì)照組相比較，體重及肝臟重量未表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。 PBS對(duì)照組、腺病毒對(duì)照組、StarD10過(guò)表達(dá)組及StarD10沉默組小鼠肝臟StarD10蛋白在肝臟組織的表達(dá)量分別為（0.8

8、693±0.02）、（0.8344±0.03）、（1.2055±0.04）、（0.5215±0.04）。StarD10過(guò)表達(dá)組StarD10蛋白表達(dá)明顯高于PBS組、腺病毒對(duì)照組，P＜0.01，StarD10沉默組StarD10蛋白表達(dá)明顯低于PBS組、腺病毒對(duì)照組，P＜0.01。二、①尾靜脈注射腺病毒包裝StarD10載體4周后，小鼠的血脂發(fā)生了明顯的變化。與基線組、PBS對(duì)照組、腺病毒對(duì)照組相比，StarD10過(guò)表達(dá)組小鼠血漿TC、

9、LDL-C略下降，HDL3-C/HDL-C比例升高。②與腺病毒對(duì)照組相比，StarD10過(guò)表達(dá)組血清3H-膽固醇的含量在48h升高了62.86％(P＜0.01)，StarD10過(guò)表達(dá)組小鼠肝臟中剩余的3H-膽固醇的含量升高了30.73％(P＜0.01);兩天中糞便排除的3H-膽固醇升高了52.72％(P＜0.01)。 StarD10沉默組膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)水平較腺病毒對(duì)照組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。③StarD10過(guò)表達(dá)組小鼠肝臟ABCA1、ABC

10、G1蛋白表達(dá)升高。④StarD10過(guò)表達(dá)組小鼠斑塊面積占管腔面積比值略低于腺病毒對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。StarD10過(guò)表達(dá)組小鼠較腺病毒對(duì)照組小鼠斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量明顯降低(P＜0.01)，斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量較病毒對(duì)照組明顯降低(P＜0.01)。
　　第二部分:①單變量分析的結(jié)果表明，TG(r=0.093，P＜0.001)與cf-PWV水平呈正相關(guān)、HDL-C(r=-0.090，P＜0.001)與cf-PWV呈負(fù)相關(guān)。

11、多元線性回歸分析結(jié)果顯示基線TG(β=0.672，P＜0.001)與cf-PWV呈顯著正相關(guān)，基線HDL-C與隨訪cf-PWV之間不存在線性相關(guān)。②按照男性、女性分類分別計(jì)算受試人群基線血脂水平和隨訪PWV的相關(guān)性，結(jié)果顯示對(duì)于女性受試者而言，基線HDL-C與隨訪cf-PWV呈負(fù)相關(guān)(β=-0.847，P=0.035)，男性受試者基線HDL-C與cf-PWV之間成正相關(guān)(β=2.263，P=0.001)。
　　結(jié)論：
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12、.腺病毒包裝StarD10過(guò)表達(dá)載體及StarD10沉默載體可轉(zhuǎn)染LDLr-/-小鼠肝臟;
　　2.StarD10過(guò)表達(dá)為小鼠脂代謝的有利因素，可以通過(guò)ABCA1、ABCG1等途徑促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，升高HDL3-L/HDL比例，并能改善小鼠主動(dòng)脈斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量、降低斑塊內(nèi)炎癥。
　　3.社區(qū)人群女性受試者HDL-C水平與cf-PWV呈負(fù)相關(guān)，男性受試者HDL-C與cf-PWV呈正相關(guān)性。HDL-C對(duì)男性、女性受試者抗動(dòng)脈僵