YAP對(duì)人肺腺癌干細(xì)胞順鉑耐藥的調(diào)控的研究.pdf

1、研究目的：
　　1、檢測(cè)對(duì)比A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞球中YAP mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　2、初步探討YAP對(duì)A549干細(xì)胞球順鉑耐藥的影響。
　　方法：
　　1、以無血清培養(yǎng)基（serum-free medium，SFM）的方法誘導(dǎo)A549細(xì)胞形成A549細(xì)胞球體。
　　2、以siRNA-YAP轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞和A549干細(xì)胞球來下調(diào)YAP mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　3、通過RT-PCR

2、法檢測(cè)經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染前后A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞球中YAP mRNA的表達(dá)水平。
　　4、通過Western Blot法檢測(cè)經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染前后A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞球中YAP蛋白的表達(dá)水平。
　　5、在siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48小時(shí)后，加藥組以順鉑處理細(xì)胞24小時(shí)。
　　6、以CCK法檢測(cè)各A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞球組的增殖抑制率。
　　7、以流式細(xì)胞儀檢測(cè)各A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞球組的細(xì)胞凋

3、亡率。
　　結(jié)果：
　　1、RT-PCR、Western Blot法檢測(cè)到：(1)A549細(xì)胞中YAP mRNA及蛋白表達(dá)均低于A549干細(xì)胞球（P＜0.05）；(2)siYAP可下調(diào)A549細(xì)胞和A549干細(xì)胞球中YAP mRNA及蛋白的表達(dá)（P＜0.05）；(3)經(jīng)siYAP轉(zhuǎn)染后的A549細(xì)胞和A549干細(xì)胞球中YAP mRNA和蛋白的表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＞0.05）。
　　2、CCK法檢測(cè)到：(1)以

4、相同的siRNA和/或順鉑處理后，A549細(xì)胞的增殖抑制率高于A549干細(xì)胞球（P＜0.05）；(2)YAP表達(dá)下調(diào)可使A549細(xì)胞和A549干細(xì)胞球的增殖抑制率較前升高（P＜0.05）；(3)順鉑引起的YAP表達(dá)下調(diào)后的A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞球的增殖抑制率均較相應(yīng)的對(duì)照細(xì)胞組高（P＜0.05）
　　3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)到：(1)以相同的siRNA和/或順鉑處理后，A549細(xì)胞的凋亡率高于A549干細(xì)胞（P＜0.05）；(2)