PDTC阻斷炎癥通路減輕大鼠放射性心臟損傷的機制研究.pdf

1、目的：建立急性放射性心臟損傷（ radiation induced heart damage, RIHD）大鼠模型，觀察 RIHD急性期心肌組織病理學變化，探討其發(fā)生機制并研究吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）對RIHD的保護作用及作用機制。
　　方法：成年雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠21只隨機分為三組(n=7)：空白對照組(Control組)、單純照射組（I

2、rradiation,IR組）和PDTC+照射組（PDTC+IR組）。
　　1.照射處理：單純照射組及 PDTC+照射組大鼠接受心前區(qū)局部20.0 Gy單次劑量照射，直線加速器下6 MV-X線，2.0 x2.0 cm大小射野，深度1.5 cm，劑量率1.8 Gy/min；
　　2.PDTC處理：照射前大鼠稱重，計算PDTC給藥量（120mg/kg）， PDTC+照射組大鼠在照射前30min腹腔注射PDTC，之后每天同一時間給

3、藥1次，直至照射后第14天。同時空白對照組及單純照射組每天給予相應體積生理鹽水腹腔注射。
　　3.形態(tài)學觀察：放射線照射后第14天處死動物進行心肌組織病理切片染色。蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin, HE）染色觀察大鼠心肌細胞、成纖維細胞及細胞間質形態(tài)學改變。Masson染色觀察心肌膠原纖維表達及分布情況，應用軟件定量分析以評價心肌纖維化程度。
　　4.生物化學檢測：放射線照射后第14天處死動物進行蛋白質免疫

4、印記法（Western blot）及實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）法分別檢測大鼠心肌組織核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）家族成員 P50、P65，低氧誘導因子-1α（hypoxia-inducible factor1α，HIF-1α）、結締組織生長因子（connective tissue growth

5、factor，CTGF）、Ⅰ型膠原（collagen typeⅠ，COL-1）蛋白及mRNA表達量的變化。
　　結果：
　　1.形態(tài)學結果：(1)石蠟切片HE染色：單純照射組與空白對照組相比，心肌細胞水腫明顯，排列紊亂，部分心肌細胞斷裂；心肌細胞核輕度固縮，核染色加深，少量異形細胞核，心肌間質可見大量炎癥細胞浸潤,成纖維細胞增多。PDTC藥物干預后再進行照射上述損傷變化均得到改善。(2)Masson染色及定量分析：單純照射組

6、膠原纖維被染為藍綠色，廣泛分布于心肌細胞間質，較對照組明顯增多，正常心肌細胞排列紊亂，有被膠原纖維替代的趨勢。定量分析單純照射組心肌膠原容積分數（ collagen volume fraction, CVF）明顯高于對照組(P＜0.05)；PDTC處理后再照射CVF下降(P＜0.05)。
　　2.Western blot和qPCR結果：(1)心肌組織P50、P65蛋白表達及mRNA水平單純照射組較對照組均升高(均 P＜0.05)，

7、PDTC+照射組較單純照射組下降(均P＜0.05)；(2)心肌組織HIF-1α蛋白濃度及mRNA水平單純照射組較對照組均升高(均P＜0.05)，PDTC+照射組較單純照射組下降(均P＜0.05)；(3)心肌組織CTGF蛋白濃度及mRNA水平單純照射組較對照組均升高(均 P＜0.05)，PDTC+照射組較單純照射組均為有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)；(4)心肌組織COL-1蛋白單純照射組較對照組升高(P＜0.05)， P

8、DTC+照射組較單純照射組下降(P＜0.05)；COL-1 mRNA水平單純照射組較對照組升高(P＜0.05)，PDTC+照射組較單純照射組有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：
　　1.放射線照射早期可引起心肌細胞炎癥，啟動NF-κB炎癥反應調控通路，組織形態(tài)學表現為心肌細胞水腫，細胞間質大量炎癥細胞浸潤；
　　2.放射線照射早期可引起心肌細胞纖維化，組織形態(tài)學表現為細胞間質成纖維細胞增多，膠原