胰島素樣生長因子1對人視網(wǎng)膜血管內皮細胞作用和機制的研究.pdf

1、背景與目的：視網(wǎng)膜病變引起的視網(wǎng)膜新生血管由于與正常的血管在結構、生長位置、功能上均有不同，不僅不能為周圍組織有效地供氧，而且由于通透性等改變可破壞正常的視網(wǎng)膜結構，影響人的視覺功能。探索視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)病機制，尋找有效的干預方法是目前眼科學領域研究的重點和熱點。胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是一種活性蛋白多肽物質，因其結構與胰島素類似而得名，在促進細胞有絲分裂與分化成熟，及

2、創(chuàng)傷愈合等方面發(fā)揮重要作用。以往有研究認為IGF-1通過與其受體IGF-1R結合后激活細胞內相應信號通路發(fā)揮促進內皮細胞增殖及抑制內皮細胞凋亡的作用，從而影響腫瘤的生長及疾病預后。而關于IGF-1在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生和發(fā)展過程中的作用方面的研究報道較少。為探討IGF-1分子在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生發(fā)展過程中的作用及可能的機制，本研究通過含不同濃度IGF-1蛋白的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜毛細血管內皮細胞（human retinal vascul

3、ar endothelial cells，HRECs），觀察不同濃度的IGF-1蛋白對HRECs遷移、凋亡及管腔形成能力的影響，并探討其對HRECs體外生物學作用的具體作用機制，以期對視網(wǎng)膜新生血管性疾病的發(fā)病機制以及為臨床研發(fā)新型治療靶點藥物提供有價值的實驗數(shù)據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.體外常規(guī)培養(yǎng)HRECs細胞系，取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。應用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測HRECs中IGF-1受體（IGF

4、-1R）基因的表達情況。
　　2.以濃度分別為10、200ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預HRECs，應用細胞劃痕法檢測不同濃度IGF-1對HRECs細胞遷移的影響。
　　3.以濃度分別為500、1000ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預HRECs，應用流式細胞技術檢測IGF-1對HRECs細胞凋亡的影響。
　　4.以濃度分別為10、100、200ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預HRECs，應用M

5、atrigel體外三維成型法檢測IGF-1對HRECs細胞管腔形成能力的影響。
　　5.以500、1000ng/ml的IGF-1培養(yǎng)液干預HRECs，應用Realtime-PCR法檢測HRECs中血小板衍生生長因子-BB（PDGF-BB）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）的mRNA表達水平。
　　結果：
　　1.HRECs細胞中存在IGF-1R的基因表達。
　　2.細胞劃痕法檢測結果顯示，

6、干預24h后，200ng/ml干預組（F=0.023,P=0.021）HRECs遷移的距離明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　3.流式細胞技術檢測結果顯示，1000ng/ml干預組（F=4.243，P=0.046）HRECs凋亡比例較對照組明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義。
　　4.Matrigel體外三維成型法檢測結果顯示，干預12h后，200ng/ml干預組（F=0.26,P=0.048）細胞完整管腔形成的數(shù)量明顯增多，差異有

7、統(tǒng)計學意義。
　　5.Realtime-PCR檢測結果顯示，經(jīng)IGF-1干預后，1000ng/ml干預組HRECs中PDGF-BB（F=5.457,t=-3.489,P=0.025）基因表達水平顯著提高，Caspase-3（F=1.093,t=7.287，P=0.002）基因表達水平顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1.IGF-1能促進HRECs遷移、管腔形成能力，并抑制HRECs的凋亡。
　　2.其