人胃癌及癌旁組織胞質(zhì)核酸氧化與MTH1表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　1.通過檢測人胃癌組織及其癌旁組織細(xì)胞質(zhì)中的RNA及線粒體DNA氧化損傷水平，觀察細(xì)胞質(zhì)RNA中的8-oxoGsn和線粒體DNA的8-oxodGsn累積情況，從而探討核酸氧化與胃癌發(fā)生的相關(guān)性。
　　2.檢測人胃癌組織及癌旁組織細(xì)胞質(zhì)中MTH1蛋白表達(dá)水平，橫向比較與之對(duì)應(yīng)的組織內(nèi)8-oxodGsn/Gsn的表達(dá)情況，從而探討MTH1蛋白表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
　　3.通過檢不同分化類型的胃癌

2、組織RNA氧化損傷程度和MTH1蛋白表達(dá)水平，探討不同組織分化類型胃癌的RNA氧化程度與MTH1蛋白表達(dá)水平的差異及相關(guān)性。
　　4.通過檢測Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中的RNA、線粒體DNA氧化損傷程度及MTH1蛋白表達(dá)水平，探討核酸氧化損傷與胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.收集人胃癌及相應(yīng)的癌旁組織51例:首先取溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院手術(shù)標(biāo)本，以距離腫瘤邊緣2cm的組織(1cm*1cm*1 cm)作為

3、癌旁對(duì)照組織;再將術(shù)中切下的腫瘤標(biāo)本十字切開，取腫瘤某一象限的組織（1cm*1cm*1cm）作為胃癌標(biāo)本，放入凍存管，并立即置于液氮中運(yùn)送，于-80℃冰箱保存待用。
　　2.臨床病理石蠟切片:將上述51例人胃癌標(biāo)本凍存并記錄，在醫(yī)院病理科選出相應(yīng)經(jīng)組織確認(rèn)的病理切片，分別切取胃癌切片及癌旁組織切片數(shù)張用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)。
　　3.應(yīng)用超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測系統(tǒng)(Polymer HRP Detection System)

4、對(duì)胃癌組織及其癌旁組織中8-氧化鳥苷（8-oxo-7，8-dihydroguanosine，8-oxoGsn），線粒體8-氧化脫氧鳥苷（8-oxo-7，8-dihydro-2'-deoxyguanosine，8-oxodGsn）和MTH1蛋白的含量進(jìn)行定性檢測。
　　4.應(yīng)用Western blotting技術(shù)定量檢測胃癌組織及其癌旁組織中MTH1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，胃癌及癌旁組織細(xì)

5、胞漿中多可檢測到8-oxoGsn及8-oxodGsn表達(dá)，且胃癌組織胞漿中8-oxodGsn/Gsn的表達(dá)量均顯著高于癌旁組織，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示胃癌組織中核酸氧化水平高，較癌旁組織其胞漿中8-oxodGsn及8-oxoGsn有大量累積趨勢。
　　2.免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，胃癌組織中MTH1蛋白表達(dá)量顯著高于癌旁組織，且其表達(dá)分布與核酸氧化損傷范圍較一致，特別與8-oxo-Gsn的表達(dá)分布趨勢有一定的相關(guān)性。
　　3.免疫組化及W

6、esternblotting結(jié)果表明，胃癌的組織學(xué)分化類型與RNA氧化和MTH1蛋白的表達(dá)有一定相關(guān)性，即分化較好的胃癌組織(Ⅰ，Ⅱ)中8-oxo-Gsn和MTH1蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)，而在分化較差的胃癌組織(Ⅱ-Ⅳ)中則表達(dá)水平較低(P＜0.05)。
　　4.將免疫組化及Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果與胃癌(TNM)臨床分期及癌腫大小等資料進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)胃癌組織核酸氧化與MTH1表達(dá)與胃癌臨床分期等其它臨床病理資料無關(guān)