尿源干細胞在促進神經(jīng)源性膀胱恢復中的研究.pdf

1、目的:
　　神經(jīng)源性膀胱(Neurogenic bladder, NB)是一種由于神經(jīng)排尿控制系統(tǒng)出現(xiàn)紊亂或功能障礙而導致的尿路功能損害，通常存在神經(jīng)系統(tǒng)的病變或者創(chuàng)傷。由于脊髓受傷的階段不同，神經(jīng)源性膀胱的臨床表現(xiàn)也不相同。脊髓損傷后造成的神經(jīng)源性膀胱膀胱的并發(fā)癥主要有尿路感染，上尿路和下尿路功能惡化，泌尿系統(tǒng)結(jié)石等。其中，上尿路損害和腎功能衰竭是神經(jīng)源性膀胱造成的最嚴重的并發(fā)癥。目前，國內(nèi)外針對神經(jīng)源性膀胱仍然缺乏研究，并且尚

2、無統(tǒng)一的治療金標準，依舊是困擾世界的難題。
　　尿源干細胞是新近發(fā)現(xiàn)的一種從人尿液中收集和提取出的細胞，具有與其他干細胞相同的特性，能夠自我更新和定向分化。同時，尿源干細胞較其他干細胞更易獲取，避免了倫理道題問題。更因其來源于泌尿系統(tǒng)，具有更好的同質(zhì)性和同源性，在泌尿系統(tǒng)的組織工程修復和疾病治療中已取得顯著效果。本實驗研究了尿源干細胞通過尾靜脈注射應用在神經(jīng)源性膀胱大鼠的疾病模型上，觀測尿源干細胞對神經(jīng)源性膀胱大鼠模型膀胱功能的修

3、復情況，為神經(jīng)源性膀胱提供新的治療思路和策略。
　　方法:
　　1.建立神經(jīng)源性膀胱模型:本研究采用雌性Sprague-Dawley大鼠(180-200g)作為實驗對象，隨機分為正常組，損傷組和干細胞組。采用自制的Allen's打擊裝置建立大鼠神經(jīng)源性膀胱模型，干細胞組大鼠模型建立一周后經(jīng)尾靜脈注射尿源干細胞。
　　2.蛋白表達檢測:注射干細胞28天后，提取膀胱總蛋白后，使用SDS-PAGE凝膠電泳分離總蛋白并用5％的

4、牛奶封閉后，孵育P2Y4多克隆抗體。孵育二抗后，使用Image系統(tǒng)檢測各組間P2Y4蛋白的濃度差異。
　　3.組織學檢測:取膀胱組織后立即稱取膀胱濕質(zhì)量，包埋成并制成石蠟切片。分別進行H.E.染色，TUNEL染色。
　　4.功能學檢測:每組大鼠在麻醉下通過尿動力學檢測觀察各組膀胱的功能差異;每組大鼠斷頸處死后通過膀胱離體逼尿肌肌條實驗觀察各組膀胱的收縮差異。
　　結(jié)果:
　　1.Western Blot法檢測顯示

5、損傷組大鼠膀胱P2Y4蛋白的表達明顯高于正常組和干細胞組大鼠。
　　2.干細胞組大鼠的膀胱濕質(zhì)量(0.31±0.01)g和膀胱濕質(zhì)量/體質(zhì)量比值(1.19±0.41)較模型組大鼠的膀胱濕質(zhì)量(0.66±0.07)g和膀胱濕質(zhì)量/體質(zhì)量比值(2.30±0.26)有明顯改善。
　　3.H.E.染色顯示損傷組大鼠的膀胱水腫嚴重，逼尿肌結(jié)構(gòu)紊亂。于細胞組大鼠的膀胱水腫減輕，逼尿肌增厚。TUNEL染色發(fā)現(xiàn)損傷組大鼠的膀胱肌細胞凋亡率(