基于多糖糖譜及結(jié)構(gòu)解析技術(shù)的黃芪種質(zhì)資源評價.pdf

1、黃芪，是山西入選國家道地藥材庫的8味道地藥材之一，用藥量巨大，素有“十方八芪”之說。目前市場上，黃芪可以分為傳統(tǒng)黃芪（仿野生種植）和移栽黃芪（育苗移栽種植）。屠鵬飛等人按照目前黃芪質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)對不同等級規(guī)格的黃芪進(jìn)行分析，得出的結(jié)論是移栽芪的品質(zhì)不亞于傳統(tǒng)芪。然而國際市場和國內(nèi)的一些老中醫(yī)并不認(rèn)可移栽芪。這些矛盾說明目前的質(zhì)量評價指標(biāo)不能夠全面準(zhǔn)確的反映黃芪品質(zhì)。因此需要建立更加合理的評價指標(biāo)。
　　多糖類是黃芪發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)活性的

2、主要物質(zhì)，同時也是黃芪中含量最豐富的化合物。但由于目前苯酚-硫酸法測總多糖含量的方法缺乏專屬性特征，不能全面反映多糖的特征。近年來發(fā)展出現(xiàn)的新技術(shù)——糖譜技術(shù)是基于糖類化合物的水解而發(fā)展形成具有專屬性特征的指紋圖譜技術(shù)，可用于多糖的定性、定量分析，還可用于藥材的鑒別和質(zhì)量評價。
　　目的:
　　通過構(gòu)建黃芪多糖糖譜，篩選出可以鑒別不同種質(zhì)資源黃芪的差異性糖片段，并對差異性糖片段進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析與活性評價，最終建立該活性糖片段的含

3、量測定方法用于不同種質(zhì)資源黃芪的評價。
　　方法:
　　對不同種質(zhì)資源的黃芪多糖進(jìn)行部分酸水解，通過PACE、HPTLC對黃芪多糖部分酸水解產(chǎn)物進(jìn)行分析獲得系列糖指紋圖譜。通過數(shù)據(jù)分析，篩選出黃芪差異性糖片段。然后通過采用GC-MS、IR、NMR等技術(shù)對黃芪差異性糖片段進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。并通過比對已有文獻(xiàn)報(bào)道的具有活性的植物多糖，獲得黃芪專屬性糖片段。通過分析黃芪專屬性糖片段的體外抗氧化能力及免疫活性獲得黃芪專屬性活性糖片段，并

4、建立該活性糖片段的含量測定方法用于不同種質(zhì)資源黃芪的評價。此外還對黃芪多糖進(jìn)行酶解和人工胃液水解構(gòu)建黃芪多糖糖譜用于不同種質(zhì)資源黃芪的鑒別。
　　結(jié)果:
　　1、基于部分酸水解的黃芪細(xì)胞可溶性多糖及糖綴合物指紋圖譜的建立及不同種質(zhì)資源黃芪的評價，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，分子量范圍在540-900Da之間的糖片段是區(qū)分黃芪栽培方式的主要差異性片段，而分子量范圍在360-720Da之間的糖片段是區(qū)分黃芪種屬的主要差異性片段。結(jié)構(gòu)分析表明差

5、異性片段主要由葡萄糖和甘露糖及木糖組成，黃芪差異性糖片段ASP-1的可能結(jié)構(gòu)為→2，3，6)-D-Glcp-(1→、D-Xylp-(1→及→4)-D-Manp-（1→。其中Glc和Man構(gòu)成主鏈，主鏈構(gòu)型為β型。通過對比已有文獻(xiàn)報(bào)道最終確認(rèn)黃芪差異性糖片段ASP-1為黃芪專屬性糖片段。對黃芪專屬性片段進(jìn)行活性分析結(jié)果表明具有較低的體外抗氧化活性，但可以誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，具有免疫調(diào)節(jié)作用。最終通過實(shí)驗(yàn)研究篩選出黃芪專屬性活性糖片段。建立了

6、專屬性活性片段含量測定方法，通過對24批黃芪樣本分析發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)黃芪中DP3＞3.0mg/mL，DP4＞3.2mg/mL，而移栽黃芪中DP3＜3.0mg/mL，DP4＜3.2mg/mL。
　　2、基于酶水解的黃芪細(xì)胞可溶性多糖及糖綴合物指紋圖譜的建立及不同種質(zhì)資源黃芪的鑒別:以12種糖苷水解酶對不同種質(zhì)資源的黃芪多糖進(jìn)行酶解，獲得系列PACE指紋圖譜，數(shù)據(jù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)每種酶水解黃芪多糖都可以產(chǎn)生一系列的糖片段，分子范圍在540-11

7、00Da是區(qū)分黃芪栽培方式的主要差異性片段。而分子量范圍在700-900Da是區(qū)分黃芪種屬的主要差異性片段。
　　3、基于人工胃液水解的黃芪細(xì)胞可溶性多糖及糖綴合物指紋圖譜的建立及不同種質(zhì)資源黃芪的鑒別:模擬人工胃液條件處理不同種質(zhì)資源的黃芪多糖，獲得系列PACE糖指紋圖譜，數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明分子范圍在900-1100Da是區(qū)分黃芪栽培方式的主要差異性片段。而分子量范圍在700-900Da是區(qū)分黃芪種屬的主要差異性片段。