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文檔簡介
1、本研究采用由大連理工大學(xué)化學(xué)生物學(xué)課題組設(shè)計、合成的8H-H-苊并[1,2-b]吡咯-9-腈衍生物1a(3-(4-甲基哌嗪)-8-氧-8H-苊并[1,2-b]吡咯-9-腈)和3a(3-(3-N,N'-二甲氨基-丙氨基)-8-氧-8H-苊并[1,2-b]吡咯-9-腈)為研究工具,研究了不同程度的DNA構(gòu)象改變在DNA損傷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用。 在確定了1a和3a與DNA的結(jié)合模式的基礎(chǔ)上,證明它們嵌入DNA雙螺旋后,對于DNA雙螺旋
2、具有不同程度的解旋作用。通過免疫細(xì)胞熒光染色,研究細(xì)胞內(nèi)的Ataxia-telangiectasia mutated(ATM)蛋白激酶能夠響應(yīng)1a和3a的脅迫,證明了一種新的能夠被細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白ATM監(jiān)測到的DNA損傷形式,同時確定了1a和3a是一對新的可以用來研究DNA損傷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)探針。 利用1a和3a具有不同程度解旋DNA的特性,研究了ATM、RNAPII、p53等蛋白在DNA損傷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用
3、、協(xié)同機(jī)制和影響因素。1a觸發(fā)的ATM磷酸化強(qiáng)于3a,因此得出結(jié)論:ATM的激活程度與DNA解旋程度相關(guān)。另外,結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)、免疫細(xì)胞染色、ChIP、定量PCR(Q-PCR)和Westem blot,研究了培養(yǎng)細(xì)胞在1a和3a的脅迫下,p53的積累及磷酸化,RNAPII的超磷酸化和次磷酸化,以及RNAPII在轉(zhuǎn)錄基因上分布動力學(xué),發(fā)現(xiàn)1a可以誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄阻滯,最終引發(fā)依賴p53的凋亡,而3a則不可以。以上的研究顯示,轉(zhuǎn)錄阻滯和DNA解旋的
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