CD147拮抗肽和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑多西環(huán)素對(duì)膽囊癌細(xì)胞的作用.pdf

1、目的:
　　膽囊癌發(fā)病率居消化道惡性腫瘤第5位，是最常見的膽道惡性腫瘤，高發(fā)年齡為50～70歲，女性患者約為男性患者的2～3倍。慢性膽囊炎和膽囊結(jié)石為膽囊癌的危險(xiǎn)因素。膽囊癌早期癥狀隱匿，疾病進(jìn)展快，惡性程度高，早期診斷較為困難，部分病例是剖腹手術(shù)時(shí)偶然發(fā)現(xiàn)。當(dāng)患者出現(xiàn)腹痛、黃疸等癥狀時(shí)，往往已處于癌癥晚期，錯(cuò)失根治性切除手術(shù)的機(jī)會(huì)。局部放療可以延長(zhǎng)膽囊癌患者的中位生存時(shí)間，然而膽囊癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生概率較高，造成放療效果大打折扣。

2、目前尚無統(tǒng)一有效的膽囊癌的化療方案，多以5-Fu、鉑類、吉西他濱、卡培他濱、阿霉素等藥物為主，其效果并沒有得到可靠的研究證實(shí)。
　　CD147是惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中重要的關(guān)鍵分子，它可以誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)的產(chǎn)生，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移;可以上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤

3、血管的生成;可以保提高瘤細(xì)胞錨著非依賴性生長(zhǎng)的能力，拮抗腫瘤細(xì)胞的失巢凋亡;促進(jìn)腫瘤細(xì)胞多耐藥性的產(chǎn)生。MMPs為細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶，MMP-9是MMPs家族成員之一，又稱為明膠酶B，其可以降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的播散和轉(zhuǎn)移，同時(shí)還可以促進(jìn)腫瘤增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)，調(diào)整各種生長(zhǎng)因子以及促進(jìn)血管形成等。相較于慢性膽囊炎、輕度不典型增生、膽囊腺瘤組織，膽囊癌組織高表達(dá)CD147和MMP-9，并且其表達(dá)與膽囊癌的分化程度、

4、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者中位生存時(shí)間呈正相關(guān)，因此CD147和MMP-9可能是膽囊癌治療的一個(gè)潛在作用靶點(diǎn)。
　　CD147拮抗肽9（Antagonist peptide，AP-9）是通過隨機(jī)噬菌體肽庫篩選出的可以特異性結(jié)合到CD147分子上的多肽，由12個(gè)氨基酸組成其可以與CD147特異性結(jié)合，并起到拮抗的作用，比如減少M(fèi)MP-9的活性。多西環(huán)素（Doxycycline，DOX）屬于第三代半合成四環(huán)素類廣譜抗生素，其可以通過抑

5、制金屬蛋白酶、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等方面途徑達(dá)到抗腫瘤的作用。
　　本研究通過觀察CD147拮抗肽9及多西環(huán)素分別及聯(lián)合用藥對(duì)膽囊癌細(xì)胞系(GBC-SD)的增殖、凋亡、CD147表達(dá)和MMP-9活性的影響，為膽囊癌的藥物治療尋求新的方法。
　　2方法:
　　將AP-9（50、100、200、400μg/ml）、DOX（5、10、20、40μg/ml）和聯(lián)合用藥（AP-9200μg/ml+ DOX20μg/

6、ml）作用于膽囊癌細(xì)胞12、24、48h，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖，western blot法檢測(cè)CD147表達(dá)，明膠酶譜法檢測(cè)MMP-9活性，Annexin V/PI染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)早期凋亡率，結(jié)果采用t檢驗(yàn)。
　　3結(jié)果:
　　不同濃度AP-9處理組的早期凋亡率（2.13±0.10）％，（2.92±0.19）％較對(duì)照組（1.58±0.08）％升高(p=0.002、p＜0.001);MMP-9活性（320.08±33.

7、90，249.59±33.63，259.63±34.08，172.31±35.20）較對(duì)照組（446.08±42.42）降低(p=0.013、0.002、0.003、0.001);增值抑制率較對(duì)照組升高（p均＜0.01）且呈時(shí)間和劑量依賴趨勢(shì)。不同濃度多西環(huán)素處理組的早期凋亡率率(3.25±0.12)％，（3.63±0.24）％較對(duì)照組（1.58±0.08）％明顯升高（p均＜0.001）;MMP-9活性(203.52±18.25，175

8、.22±23.30，147.86±22.83，109.99±29.22)較對(duì)照組（446.08±42.42）降低(p=0.001、p＜0.001、p＜0.001、p＜0.001);增值抑制率較對(duì)照組升高（p均＜0.01），CD147表達(dá)（0.97±0.12，0.80±0.10，0.69±0.11，0.51±0.12）較對(duì)照組明(2.0±0.15)顯降低（p均＜0.001）。聯(lián)合用藥后較單獨(dú)用藥，細(xì)胞增殖抑制率（38.78±0.39）％，