破壁靈芝孢子粉沖劑毒性研究及免疫效應(yīng).pdf

1、靈芝是著名的藥用真菌之一，靈芝孢子是靈芝的生殖細(xì)胞，富含多糖、三萜類、多種氨基酸等生理活性物質(zhì)，具有抑制腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等多種生理功能。靈芝孢子經(jīng)破壁后，有利于有效成分的釋放和使用，目前國內(nèi)外常被用來制作保健品的原料。本文主要探討，破壁靈芝孢子粉的安全性以及免疫調(diào)節(jié)作用。
　　1一般毒性試驗(yàn)
　　1.1小鼠經(jīng)口急性毒性，經(jīng)口一次性灌胃最大濃度0.25g/mL，連續(xù)觀察14天，動物無死亡，無中毒，無異常，飲食飲水正常，可判定是無

2、毒。
　　1.230天喂養(yǎng)試驗(yàn)，長時間喂飼不同劑量的破壁靈芝孢子粉，觀察其對動物引起有害反應(yīng)的劑量，經(jīng)過大鼠腹主動脈采血，檢測血常規(guī)，血生化，動物大體解剖，組織病理學(xué)檢測，各劑量組結(jié)果與對照組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，由此可初步認(rèn)為在本試驗(yàn)條件下長期服用破壁靈芝孢子粉對機(jī)體并無明顯不良反應(yīng)，基本上是安全的。
　　2特殊毒性試驗(yàn)
　　2.1鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶(Ames)試驗(yàn)，利用平板摻入法檢測供試品的誘變性，預(yù)測

3、其遺傳危害乖可能的潛在致癌作用。結(jié)果破壁靈芝孢子粉對鼠傷寒沙門氏菌的TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗(yàn)菌株，在加與不加S-9時，都沒有發(fā)現(xiàn)破壁靈芝孢子粉有致基因突變作用。
　　2.2小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)，采用30h給受試物法，兩次給受試樣品間隔24h，第二次在給受試樣品6h后頸椎脫臼法處死動物，取胸骨，擠出骨髓，常規(guī)制片、封片、鏡檢。結(jié)果破壁靈芝孢子粉低，中，高劑量組的微核率與陰性對照組（無菌水）相比沒有顯著性差異

4、(P＞0.05)，而陽性對照組（環(huán)磷酰胺）則顯著高于陰性對照組(P＜0.01)。經(jīng)過觀察統(tǒng)計(jì)分析，破壁靈芝孢子粉對小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核形成及PCE/RBC比值沒有產(chǎn)生影響，得出破壁靈芝孢子粉對小鼠骨髓細(xì)胞不具有誘發(fā)突變作用。
　　2.3小鼠精子畸形試驗(yàn)，小鼠連續(xù)灌胃5天，在第一次給受試樣品的第35天，頸椎脫臼法處死動物，取兩側(cè)附睪精子濾液，按常規(guī)制片、封片、鏡檢并記錄精子形態(tài)及數(shù)目。結(jié)果低，中，高劑量組的精子畸形率與陰性對照組

5、（無菌水）比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05），而陽性對照組（環(huán)磷酰胺）則顯著高于陰性對照組(P＜0.01)。所以破壁靈芝孢子粉對小鼠的精子畸形率沒有明顯影響。
　　3增強(qiáng)免疫力功能試驗(yàn)
　　小鼠根據(jù)體重大小隨機(jī)分組，灌胃不同濃度(166.7mg/kg·bw/d、333mg/kg·bw/d、1000mg/kg·bw/d)的破壁靈芝孢子粉第30d后，分別測定破壁靈芝孢子粉溶液對細(xì)胞免疫、體液免疫、單核巨噬細(xì)胞吞噬功能和自然殺傷(

6、NK)細(xì)胞活性影響，從而鑒定破壁靈芝孢子粉的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　1.1用MTT法進(jìn)行刀豆蛋白A誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，結(jié)果高劑量組加ConA孔與不加ConA孔光密度的差值高于對照組，所以差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　1.2小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，耳腫脹法，結(jié)果二硝基氟苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)檢測中，低劑量組、中劑量組、高劑量組耳殼增重與對照組比較，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　1.3抗體的生成細(xì)胞

7、檢測試驗(yàn)，結(jié)果高劑量組的溶血空斑數(shù)比對照組的高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　1.4血清溶血素檢測試驗(yàn)，結(jié)果高劑量組的小鼠血清半數(shù)溶血值比對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　1.5自然殺傷(NK)細(xì)胞活性的測定（乳酸脫氫酶測定法），高劑量組NK細(xì)胞活性與對照組組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）。
　　1.6碳廓清試驗(yàn)，中劑量、高劑量組吞噬指數(shù)a與對照組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0