ST6GalNAcⅡ在乳腺癌侵襲過程中的作用機(jī)制及表達(dá)的臨床意義.pdf

1、目的:研究唾液酸轉(zhuǎn)移酶ST6GalNAcⅡ和PI3K/Akt-NFkB信號通路在乳腺癌細(xì)胞侵襲過程中的作用及分子機(jī)制，分析ST6GalNAcⅡ表達(dá)與乳腺癌臨床特征的相關(guān)性，從而進(jìn)一步明確新的乳腺癌診斷和治的靶向分子。
　　方法:分別運用逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR和western blot方法研究ST6GalNAcⅡ在乳腺癌細(xì)胞系(人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、MCF-7)中的基因和蛋白表達(dá)水平，并探究ST6GalNAcⅡ在乳腺癌細(xì)胞

2、侵襲過程中的作用機(jī)制:(1)用蛋白印跡方法分析ST6GalNAcⅡ基因敲除（用shRNA）后ST6GalNAcⅡ蛋白表達(dá)情形，然后在ST6GalNAcⅡ基因敲除后，運用transwell侵襲實驗，進(jìn)一步研究乳腺癌腫瘤細(xì)胞體外侵襲能力。(2)購置45只5周大雌性裸鼠并分為3組，將ST6GalNAcⅡshRNA處理過的MDA-MB-231細(xì)胞注入到每只裸鼠的腋下，并用control-shRNA轉(zhuǎn)染過的MDA-MB-231細(xì)胞和正常MDA-M

3、B-231細(xì)胞組作為對照，喂養(yǎng)小鼠成瘤后，分離腫瘤，稱重并拍照;免疫組化分析ST6GalNAcⅡ蛋白在小鼠成瘤中的表達(dá)及與乳腺癌侵襲的相關(guān)性。(3)用shRNA將ST6GalNAcⅡ基因沉默后，分析PI3K/Akt-NFkB信號分子的表達(dá)及活性差異;探尋抑制MDA-MB-231細(xì)胞中PI3K/Akt信號通路（通過用PI3K抑制劑LY294002和Akt siRNA來實現(xiàn)）后，PI3K/Akt-NFkB通路對MDA-MB-231細(xì)胞侵襲性

4、的作用及分子機(jī)制。收集大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院于2011年7月到2013年7月經(jīng)手術(shù)治療（患者術(shù)前術(shù)后都未行放化療）的乳腺癌和癌旁組織標(biāo)本各101例，于病案室收集這些患者詳細(xì)的病歷信息，并運用免疫組化方法來探討ST6GalNAcⅡ蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床特征間的關(guān)系。
　　結(jié)果:與低侵襲性MCF-7細(xì)胞系相比，ST6GalNAcⅡ在MDA-MB-231細(xì)胞系中具有更高的表達(dá)水平;MDA-MB-231細(xì)胞中ST6GalNAcⅡ基因沉默抑

5、制了細(xì)胞在體外的侵襲性并抑制了MDA-MB-231細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤性;shRNA抑制ST6GalNAcⅡ表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞中信號通路分子的磷酸化水平明顯下降;用PI3K特異性抑制劑LY294002及Akt siRNA阻斷PI3K/Akt信號通路，明顯抑制NFkB的活性及MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲性。ST6GalNAcⅡ蛋白表達(dá)水平與乳腺癌患者年齡、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等因素之間沒有關(guān)聯(lián)(p＞0.05)，但與乳腺癌的組織病理