通陽中藥數(shù)據(jù)挖掘及蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂異常的實驗研究.pdf

1、目的:
　　通過數(shù)據(jù)挖掘分析探討通陽中藥的特點及分類，運用基因芯片技術(shù)尋找蔥白提取物對血脂的調(diào)控基因、實時熒光定量PCR檢測肝組織中FGF21、LXR-a、LXR-B、SCAP mRNA的表達。Western-blot檢測肝組織中SREBP-1c、SREBP-1、SREBP-2蛋白的表達，探討蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂異常的作用機制。
　　方法:
　　第一部分 通過文獻資料的回顧性分析并運用數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)探求通陽中藥的特點并總結(jié)

2、歸納通陽方法的分類。
　　我們從《中華醫(yī)典》（《中華醫(yī)典》收錄民國以前中國歷代醫(yī)學(xué)古籍1000部，卷帙近萬，近4億字，匯集了此前的歷代主要中醫(yī)著作）中，利用計算機檢索，以“通陽”為檢索詞，檢索到相關(guān)條文892條。閱讀條文后納入論述某種中藥具有通陽作用的條文為研究對象。參照相關(guān)教材和出版物，對文獻數(shù)據(jù)進行包括糾錯與填補、數(shù)據(jù)的規(guī)范化的預(yù)處理。研究用頻數(shù)、聚類分析探討通陽中藥的作用特點和分類。
　　第二部分 主要是在我們前期研究

3、的基礎(chǔ)上，以通陽中藥代表藥蔥白為研究對象，探討蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂異常的作用機制。
　　32只雄性SPF級SD大鼠(180±20)g，隨機分為空白對照組、模型組、血脂康組、蔥白提取物組4組，每組8只。本研究通過喂食高脂飼料（高脂飼料配方:82.3％基礎(chǔ)飼料添加豬油10％，2％膽固醇，5％蔗糖，0.5％脫氧膽酸鈉，0.2％甲硫氧嘧啶。由北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn)提供）6周建立高脂血癥模型，喂養(yǎng)6周后CHOL和LDL-C升高明顯

4、(P＜0.05)，造模成功。蔥白提取物由武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑中心提供。根據(jù)人動物換算劑量，蔥白提取物組給予42mg/kg蔥白提取物灌胃，血脂康組給予250mg/kg血脂康灌胃，空白對照組、模型組大鼠給予同體積生理鹽水灌胃，每天一次。我們利用基因芯片技術(shù)研究蔥白提取物對血脂的調(diào)控基因，根據(jù)差異倍數(shù)(fold change)篩選差異表達基因，并運用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測肝組織中FGF21、SCAP、LXRs(LXRα、LXRβ)的表

5、達，Western-blot檢測肝組織中SREBP-1c、SREBP-1、SREBP-2的表達。
　　結(jié)果:
　　1.本次研究共收集通陽中藥38味，涉及條文292條次。從中藥性味角度，發(fā)現(xiàn)通陽中藥以辛味、溫性最多，辛味和溫?zé)嵝越M合在一起的概率是最高的，也是最常見的，38味通陽中藥中有19味屬于辛溫（熱）通陽中藥，辛溫（熱）通陽法是通陽法中最常見的方法，可將通陽中藥主要分為辛溫（熱）通陽中藥、苦寒通陽中藥、淡以通陽中藥。從歸經(jīng)

6、角度，發(fā)現(xiàn)通陽中藥對心、肝、脾、肺、腎經(jīng)作用更為明顯，可將通陽中藥主要分為宣通肺陽、溫通心陽、暢通脾陽、疏通肝陽、通達腎陽等。蔥白辛溫，歸肺、胃經(jīng)，而辛、溫是四氣五味中出現(xiàn)次數(shù)最多的，肺、胃經(jīng)亦是歸經(jīng)中出現(xiàn)次數(shù)最多的，具有通陽中藥的典型特征。而且涉及通陽中藥的292條次中，出現(xiàn)頻率有110條次，為最多。
　　2.各組均連續(xù)給藥6周后，蔥白提取物、血脂康均可以顯著降低CHOL、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平（P＜0.05）

7、。與對照組血脂康相比，蔥白提取物在降低CHOL、TG、LDL-C水平方面優(yōu)于血脂康（P＜0.05），造模后模型組肝指數(shù)升高明顯（P＜0.05），而體重反而減輕，說明脂質(zhì)在肝臟沉積，體重減輕可能與喂食高脂飼料后大鼠食欲下降相關(guān)。而所有藥物對體重和肝指數(shù)水平影響不大，蔥白提取物還可以減少脂質(zhì)在肝臟、腎臟和附睪脂肪組織中的沉積，其作用與血脂康無明顯差異，具有良好的臨床運用前景。
　　3.模型組和蔥白提取物組基因芯片檢測數(shù)據(jù)標(biāo)化后，篩選出

8、表達上調(diào)2倍以上并有統(tǒng)計學(xué)意義的差異基因59個，其中表達上調(diào)的基因16個，表達下調(diào)的基因43個。查閱文獻綜合分析這些基因的功能特點，發(fā)現(xiàn)與調(diào)控血脂密切相關(guān)的基因主要有肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1B(carnitinepalmitoyltransferase1b，muscle，Cpt1b)、誘導(dǎo)細胞死亡DNA片斷化因子a樣效應(yīng)因子A(cell death-inducing DFFA-like effector a，Cidea)、載脂蛋白2(lipo

9、calin2，Lcn2)、硬脂酰輔酶A去飽和酶(stearoyl-coenzyme Adesaturase，SCD)、成纖維細胞生長因子-21(fibroblast growth factor21，F(xiàn)GF21)等。發(fā)現(xiàn)蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂的作用機制可能與上調(diào)FGF21、Cpt1b、基因的表達、降低Lcn2、SCD基因的表達和SREBP-1、SREBP-1C的蛋白水平有關(guān)，而與SCAP基因和LXR-a、LXR-B、SREBP-2蛋白的關(guān)系不

10、大，蔥白提取物降低膽固醇的機制有待進一步探討。既往研究發(fā)現(xiàn)SREBP-1c誘導(dǎo)SCD的表達，SCD激活CPT1的活性，三者有一定的聯(lián)系，蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂的機制可能與減少SREBP-1c蛋白和SCD的表達的同時，CPT1b的表達上調(diào)，增強脂肪酸β氧化相關(guān)。既往研究發(fā)現(xiàn)SREBP-1c是FGF21抑制核固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，我們的研究結(jié)果顯示蔥白提取物組大鼠SREBP-1c蛋白和FGF21基因的表達下調(diào)，蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂的機制蔥白提

11、取物調(diào)節(jié)血脂的機制可能與減少SREBP-1c蛋白、上調(diào)FGF21的表達，增加脂肪的利用、消耗及轉(zhuǎn)運有密切關(guān)系。同時蔥白提取物還可以減少肝臟TC、TG含量，這可能也與下調(diào)SCD、上調(diào)FGF21的表達相關(guān)。蔥白提取物可以下調(diào)Lcn2的表達。蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂的機制可能與減少前脂肪細胞分化為脂肪細胞有關(guān)。
　　4.基因芯片結(jié)果顯示，F(xiàn)GF21是蔥白提取物調(diào)節(jié)血脂的差異基因，而SCAP卻不是，熒光定量PCR的結(jié)果與基因芯片一致，基因芯片的