Bmp7在肛門(mén)直腸畸形大鼠胚胎發(fā)育中時(shí)空性表達(dá)的研究.pdf

1、目的:
　　探討B(tài)mp7在正常及肛門(mén)直腸畸形(anorectal malformation，ARM)大鼠胚胎肛門(mén)直腸發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式，并分析其在大鼠ARM的發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮的作用。
　　方法:
　　將確認(rèn)已受孕大鼠隨機(jī)分成兩組:乙烯硫脲（ethylenethiourea，ETU）處理組及對(duì)照組。在ETU處理組中，在孕齡（gestational day，GD）10天時(shí)按125mg/Kg給予大鼠1％ ETU，對(duì)照組給

2、予相同劑量的生理鹽水。分別在大鼠GD13-GD16天時(shí)剖宮取胎，約二分之一胎鼠經(jīng)4％多聚甲醛固定12-24小時(shí)，常規(guī)脫水，石蠟包埋，行4μm矢狀面連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組化染色。剩余約二分之一胎鼠在液氮中冷凍保存，于冰凍切片機(jī)上連續(xù)矢狀位切片，準(zhǔn)備提取組織蛋白，進(jìn)行WesternBlot檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　免疫組化染色結(jié)果顯示，正常組中，GD13天，Bmp7在尿直腸膈上皮和后腸上皮大量表達(dá)，GD14天， Bmp7陽(yáng)性細(xì)胞廣泛

3、分布在尿直腸膈、后腸和泄殖腔膜。GD15天，尿直腸膈的融合部分以及菲薄的肛膜處Bmp7陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)。GD16天， Bmp7陽(yáng)性細(xì)胞分布在肛門(mén)直腸上皮。畸形組中，泄殖腔上皮，尿直腸膈上皮和肛門(mén)直腸上皮僅有少量Bmp7陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示，Bmp7蛋白表達(dá)在后腸發(fā)育過(guò)程中呈現(xiàn)時(shí)間變化，在肛門(mén)形成即GD15天時(shí)達(dá)到高峰。GD13-GD16天時(shí)ARM組Bmp7蛋白的表達(dá)水平要明顯低于同時(shí)期正常組(GD13，0.45

4、0±0.007(正常組)vs.0.352±0.008（畸形組）;GD14，0.796±0.006（正常組）vs.0.334±0.007（畸形組）;GD15，0.903±0.011（正常組）vs.0.620±0.010（畸形組）;GD16，0.755±0.006（正常組）vs.0.656±0.002（畸形組）;P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1、ETU致畸的ARM大鼠胚胎肛門(mén)直腸發(fā)育過(guò)程中Bmp7的表達(dá)存在