異氟醚后處理通過抑制線粒體通道轉(zhuǎn)換孔的開放對缺血缺氧性腦損傷新生大鼠腦保護作用的研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過建立新生大鼠缺血缺氧性腦損傷(Hypoxic-Ischemic brain injury，HIBI)模型，探討異氟醚后處理對缺血缺氧性腦損傷新生大鼠的腦保護作用是否通過抑制線粒體通道轉(zhuǎn)換孔(Mitochondrial permeability transition pore，mPTP)的開放實現(xiàn)。
　　方法：
　　一、實驗動物及分組
　　新生SD(Sprague-Dawley)大鼠360只，

2、7d齡，體重12～16 g，采用隨機數(shù)字表法，將360只新生SD大鼠隨機分為8組(n=45):假手術(shù)組（Sham組）、假手術(shù)+異氟醚后處理組（Sham+Iso組）、腦缺血缺氧組(HI組);腦缺血缺氧+異氟醚后處理組（Iso組）;腦缺血缺氧+蒼術(shù)苷組（HI+Atr組）;腦缺血缺氧+蒼術(shù)苷+異氟醚后處理組(HI+Atr+Iso組);腦缺血缺氧+環(huán)孢素A（HI+CsA組）及腦缺血缺氧+環(huán)孢素A+異氟醚后處理組（HI+CsA+Iso組）。每組又

3、分為三個亞組:線粒體通道轉(zhuǎn)換孔吸光度檢測組(n=10);左右大腦半球質(zhì)量及腦病理學(xué)檢測組(n=20);行為學(xué)檢測組(n=15)。
　　二、實驗方法
　　Sham組和Sham+Iso組左側(cè)頸總動脈只穿線不結(jié)扎，HI～HI+CsA+Iso組均行左側(cè)頸總動脈結(jié)扎術(shù)，術(shù)后2～3h將HI～HI+CsA+Iso組放入37℃的水浴環(huán)境中，給予8％O2-92％N2混合氣體處理2h，制備新生大鼠缺血缺氧性腦損傷動物模型。各組于模型建立（或假手

4、術(shù)）后，側(cè)腦室注射蒼術(shù)苷、環(huán)孢素A或生理鹽水，然后將Sham+Iso組、Iso組、HI+Atr+Iso組及HI+CsA+Iso組放入半密閉箱內(nèi)，持續(xù)吸入1.5％異氟醚(30％O2+70％N2)30min:同時，Sham組、HI組、HI+Atr組及HI+CsA組放入半密閉箱內(nèi)，持續(xù)吸入不含異氟醚的混合氣體(30％O2+70％N2)30min，待大鼠蘇醒后，放回籠中正常喂養(yǎng)。線粒體通道轉(zhuǎn)換孔吸光度檢測組，于缺血缺氧后24h，進行吸光度檢測;

5、左右大腦半球質(zhì)量及腦病理學(xué)檢測組，于缺血缺氧后7d，進行左右半腦半球質(zhì)量比較及腦病理學(xué)檢測;行為學(xué)檢測組，于缺血缺氧后30d～35d行Morris水迷宮實驗;水迷宮實驗結(jié)束后，取腦組織進行病理學(xué)檢測。
　　結(jié)果：
　　與Sham組比較，HI組、Iso組、HI+Atr組、HI+Atr+Iso組、HI+CsA組及HI+CsA+Iso組線粒體通道性轉(zhuǎn)換孔540nm吸光密度值改變（△OD540nm）增加(P＜0.05)，左側(cè)腦半球質(zhì)

6、量及左右腦半球質(zhì)量比值降低(P＜0.05)，缺血缺氧后7d及35d丘腦腹后內(nèi)側(cè)核及海馬CA3區(qū)左右側(cè)正常神經(jīng)元密度比降低(P＜0.05):HI組、HI+Atr組及HI+Atr+Iso組平均逃逸潛伏期延長(P＜0.05)，穿平臺次數(shù)、平臺象限時間百分比、平臺象限路程百分比降低(P＜0.05)，Iso組、HI+CsA組及HI+CsA+Iso組差異無統(tǒng)計學(xué)意義;而Sham+Iso組上述各項指標無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　與HI組

7、比較，Iso組、HI+CsA組及HI+CsA+Iso組線粒體通道性轉(zhuǎn)換孔540nm吸光密度值改變（△OD540m）降低(P＜0.05)，左側(cè)腦半球質(zhì)量及左右腦半球質(zhì)量比值增加(P＜0.05)，缺血缺氧后7d及35d丘腦腹后內(nèi)側(cè)核及海馬CA3區(qū)左右側(cè)正常神經(jīng)元密度比升高(P＜0.05)，平均逃逸潛伏期縮短(P＜0.05)，穿平臺次數(shù)、平臺象限時間百分比、平臺象限路程百分比升高(P＜0.05);而HI+Atr組及HI+Atr+Iso組上述指

8、標無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　與Iso組比較，HI+Atr組、HI+Atr+Iso組線粒體通道性轉(zhuǎn)換孔540nm吸光密度值改變（△OD540m）增加(P＜0.05)，左側(cè)腦半球質(zhì)量及左右腦半球質(zhì)量比值降低(P＜0.05)，缺血缺氧后7d及35d丘腦腹后內(nèi)側(cè)核及海馬CA3區(qū)左右側(cè)正常神經(jīng)元密度比降低(P＜0.05)，平均逃逸潛伏期延長(P＜0.05)，穿平臺次數(shù)、平臺象限時間百分比、平臺象限路程百分比降低(P＜0.05);而

9、HI+CsA組及HI+CsA+Iso組上述指標無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　各組大鼠缺血缺氧前、缺血缺氧后7d及缺血缺氧后35d體質(zhì)量，缺血缺氧后7d右側(cè)腦半球質(zhì)量，生存率及游泳速度組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、異氟醚后處理對HIBI新生大鼠有腦保護作用;異氟醚后處理可以抑制HIBI所致的mPTP的開放;異氟醚后處理對HIBI生大鼠的腦保護作用可能是通過抑制mPTP的開放實現(xiàn)的。