自噬與模式識別受體在小鼠Sertoli細胞及附睪上皮細胞天然抗病毒反應中的功能.pdf

1、背景與目的:睪丸與附睪會受到多種病原體（細菌、病毒、真菌和寄生蟲）的感染，損傷男性生育。組織特異細胞具有抵御病原體的天然防御功能，其調節(jié)機制有待研究。Sertoli細胞中的模式識別受體Toll樣受體3(TLR3)可以啟動天然抗病毒反應。自噬可以直接清除病原體，也可以調節(jié)天然免疫。本論文旨在分析Sertoli細胞中自噬和TLR3信號通路的相互調節(jié)機制，以及附睪上皮細胞(EEC)的天然抗病毒機制。
　　材料與方法:利用TLR3敲除小鼠

2、為模型、結合RNA干擾技術研究相關基因的功能。通過Real-time qRT-PCR定量分析基因mRNA的表達水平;利用Western blot和免疫組化研究蛋白的表達及定位;利用ELISA來測定細胞因子濃度;利用poly(I:C)轉染細胞和小鼠，模擬病毒感染;利用雷帕霉素(Rap)和巴弗洛霉素(Baf-A1)調節(jié)自噬。
　　結果:兩個重要的自噬調節(jié)基因beclin-1和LC3在Sertoli細胞中高表達;在受到配體poly(I:

3、C)刺激之后，野生型小鼠Sertoli細胞中的免疫調節(jié)因子IFN-β以及抗病毒蛋白ISG15、OAS1和MX1的表達水平明顯升高，但TLR3敲除之后這些因子和蛋白的表達受到抑制;干擾素調節(jié)因子3(IRF3)參與poly(I:C)誘導的Sertoli細胞的天然抗病毒反應;Poly(I:C)轉染能促進Sertoli細胞的自噬;自噬能促進抗病毒應答。附睪上皮細胞表達TLR3和RIG-I，并可被poly(I:C)激活，啟動抗病毒反應。