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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
研究PI3K/mTOR信號(hào)通路抑制劑NVP-BEZ235體外抑制甲狀腺癌細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)其凋亡的作用及分子機(jī)制,為甲狀腺癌的臨床治療提供新的分子靶點(diǎn)。
方法:
體外培養(yǎng)甲狀腺癌 SW579細(xì)胞,采用 MTT檢測(cè)抑制劑 NVP-BEZ235對(duì)甲狀腺癌SW579細(xì)胞的抑制作用,繪制SW579生存曲線,篩選藥物濃度。SW579細(xì)胞中加入100nM、250μM的BEZ235藥物,對(duì)照組加入等體積的DMSO
2、,作用48h后,提取蛋白,應(yīng)用Western blot法檢測(cè)甲狀腺癌SW579細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B1和Cyclin D1的變化情況,檢測(cè) BEZ235對(duì) SW579細(xì)胞周期的抑制作用。再次應(yīng)用 Western blot法檢測(cè)PI3K/mTOR信號(hào)通路蛋白和凋亡蛋白的變化情況。
結(jié)果:
1. NVP-BEZ235可抑制SW579細(xì)胞的增殖。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用BEZ235阻斷PI3K/
3、mTOR信號(hào)通路可抑制甲狀腺癌細(xì)胞SW579的增殖;Western blot結(jié)果表明,甲狀腺癌SW579細(xì)胞中Cyclin A、Cyclin B1和Cyclin D1蛋白的表達(dá)水平均隨BEZ235的濃度(100nM、250μM)增高而降低。2. NVP-BEZ235可抑制PI3K/mTOR信號(hào)通路蛋白的表達(dá)。甲狀腺癌SW579細(xì)胞中p-Akt、p-S6和p-4E-BP1蛋白的表達(dá)水平均隨BEZ235的濃度(100nM、250μM)增高而
4、降低。3. NVP-BEZ235可通過激活caspase-3/8和 PARP來誘導(dǎo)SW579細(xì)胞凋亡。Western blotting結(jié)果顯示,經(jīng)NVP-BEZ235處理后,Caspase-3、Caspase-8和PARP出現(xiàn)裂解條帶,且隨NVP-BEZ235濃度的升高而表達(dá)增強(qiáng)。
結(jié)論:
1. NVP-BEZ235可通過下調(diào)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)效抑制體外甲狀腺癌 SW579細(xì)胞的增殖。
2. NVP-BEZ
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