蘋果多酚50％乙醇提取物對抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases，IBD)，臨床表現(xiàn)以血性腹瀉，腹部絞痛，疼痛，是一種免疫介導(dǎo)的影響腸粘膜的易復(fù)發(fā)的慢性疾病。IBD患者，相比與普通人群，也更高易患結(jié)直腸癌?？肆_恩病(Crohn's disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是炎癥性腸病最常見的兩種形式。潰瘍性結(jié)腸炎的病變范圍廣，病情易反復(fù)，并且其確切發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，因此目前對潰瘍性結(jié)

2、腸炎的治療難度較大?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要以5-氨基水楊酸、類固醇激素、免疫抑制劑三大類藥物進(jìn)行治療。但是，5-氨基水楊酸類是非特異性抗炎藥物，對于潰瘍性結(jié)腸炎只能起到暫時控制及緩解癥狀的效果，無法從根本上治療疾病且服用該藥物后會出現(xiàn)頭痛、腎毒性等毒副作用，停藥后病情易反復(fù)。蘋果能降低某些癌癥、心血管疾病、哮喘、糖尿病發(fā)病的風(fēng)險。蘋果的提取物蘋果多酚中含有好幾種黃酮類化合物和某些植物化學(xué)物質(zhì)，包括槲皮素苷，兒茶素，表兒茶素，原花青素，矢車菊素半乳

3、糖苷，香豆酸，綠原酸，沒食子酸和根皮苷。本實(shí)驗(yàn)觀察蘋果多酚50％乙醇提取物(50％ ethanolic extractof apple polyphenols，AP50E)對葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulfate，DSS)誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的治療作用及作用機(jī)制的初步探究，為新型潰瘍性結(jié)腸炎的保健食品的開發(fā)利用或治療藥物的開發(fā)提供依據(jù)。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)采用2.5％的DSS自由飲水對小鼠進(jìn)行潰瘍性結(jié)腸炎模型建

4、立，將C57小鼠隨機(jī)分為模型對照組、陽性藥組（奧沙拉嗪）、低劑量組(AP50E，300mg/kg)、高劑量組（AP50E，600mg/kg）及正常組，灌胃給藥，并詳細(xì)記錄小鼠飲水量、飲食量及體重變化，連續(xù)給藥7天后斷頭取血保留血清，截取結(jié)腸并測定其長度，將部分結(jié)腸用多聚甲醛固定，進(jìn)行病理切片。并對下面的參數(shù)進(jìn)行了評估:結(jié)腸長度、結(jié)腸重量及病變程度評分，病理學(xué)評分及血清生化指標(biāo)（丙二醛，髓過氧化物酶，白細(xì)胞介素10和腫瘤壞死因子α）。在C

5、aco-2細(xì)胞中加入佛波酯(phorbol12-myristate13-acetate，PMA)，同時加入不同濃度的AP50E，繼續(xù)培養(yǎng)12h后，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并取培養(yǎng)基測其中IL-12含量，用Western-Blot方法測定細(xì)胞中Akt的含量。
　　結(jié)果:
　?、俳o藥一周后，模型對照組相比于給藥組和正常組飲水量有明顯上升;攝食量除正常組明顯增多外，其他組之間沒有明顯改變。
　?、诔＝M小鼠體重沒有明顯變化外，其他

6、組小鼠體重均有所降低，給藥組小鼠體重下降明顯小于模型對照組。
　?、勰Ｐ蛯φ战M小鼠結(jié)腸萎縮程度最大，陽性藥組、低劑量組和高劑量AP50E組小鼠的結(jié)腸萎縮程度均有降低。
　?、軠y定實(shí)驗(yàn)小鼠的腸重與體重比值，結(jié)果顯示AP50E對腸道有一定保護(hù)作用。
　?、輰?shí)驗(yàn)小鼠結(jié)腸組織H-E染色病理切片結(jié)果顯示，陽性藥組、低劑量組和高劑量AP50E組小鼠結(jié)腸的病理損傷與模型對照組相比，均有所緩解。
　　⑥模型對照組小鼠血清中MDA

7、含量明顯上升，高劑量AP50E組小鼠血清中MDA含量有所降低。
　?、吣Ｐ蛯φ战M小鼠較正常組小鼠，血清中的TNFα含量明顯升高，IL-10含量明顯降低， AP50E干預(yù)后TNFα含量明顯降低，IL-10含量明顯升高。
　?、嗄Ｐ蛯φ战M小鼠結(jié)腸中的MPO活性明顯升高， AP50E干預(yù)后MPO活性明顯降低;AP50E也可抑制結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞中COX-2的表達(dá)。
　?、酇P50E對Caco-2細(xì)胞中加入PMA后引起的細(xì)胞凋亡

8、有一定的保護(hù)作用，經(jīng)Western Blot分析發(fā)現(xiàn)，AP50E對抗凋亡的作用與上調(diào)Akt的蛋白表達(dá)有關(guān)。
　?、釶MA誘導(dǎo)可使模型組Caco-2細(xì)胞的IL-12產(chǎn)生量明顯升高，而AP50E給藥干預(yù)后Caco-2細(xì)胞的IL-12產(chǎn)生量明顯下降。
　　結(jié)論:
　　經(jīng)AP50E治療后，結(jié)腸充血、水腫、萎縮等急性癥狀均有所緩解。作用機(jī)制可能與減輕氧化應(yīng)激的損傷、抑制小鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生;調(diào)節(jié)體內(nèi)及結(jié)腸局部細(xì)胞因子的水平