亞低溫對脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺組織TLR2-MyD88信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的:本研究旨在研究亞低溫(32-34℃)治療對經(jīng)氣道滴入脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)形成急性肺損傷(acute lung injury，ALI)大鼠Toll樣受體2/髓樣分化因子88(TLR2/MyD88)通路中炎性介質(zhì)及炎性因子變化的影響。包括相關(guān)炎性蛋白纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）、TLR2、MyD88及核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65(NF-κB p65)的變化。
　　方法:90只雄性SD大

2、鼠按隨機數(shù)字表法被分成四組:對照組、非控溫組、控溫組及亞低溫組。對照組樣本數(shù)為18，其余各組均為24。將大鼠分離出左勁總動脈后置入留置針以備用，第一次抽取動脈血行血氣分析，分離氣管后對照組滴入生理鹽水，0.5 mL/kg;非控溫組、控溫組及亞低溫組各滴入等量的LPS。氣道滴入后行呼吸機輔助通氣，1h后第二次抽取動脈血行血氣分析并對亞低溫組及控溫組實施目標性物理降溫，分別控制肛溫為亞低溫組32～34℃、控溫組36～37℃，對照組及非控溫組

3、不加以干預(yù)。分別于溫度干預(yù)后1h，6h，12h分批處死大鼠，處死前第三次抽取動脈血行血氣分析。取右肺以生理鹽水灌洗收集肺泡灌洗液，后將右肺保存于10％福爾馬林中，并于后期進行石蠟切片，光鏡觀察肺組織，進行病理改變半定量評分。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測肺泡灌洗液中PAI-1蛋白表達;將左肺保存于-80℃冰箱，并于后期提取肺組織內(nèi)總RNA及總蛋白，進行實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測TLR2mRNA、MyD88

4、 mRNA表達，蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(Western Blot)檢測NF-κ B p65蛋白表達。
　　結(jié)果:1、動脈血氣分析:滴入LPS前，各組氧和指數(shù)無明顯差別;滴入LPS后1小時，對照組氧和指數(shù)較滴入前無明顯變化，急性肺損傷模型組較滴入前及對比同時段對照組明顯下降，提示急性肺損傷模型成功建立;干預(yù)后，同時段亞低溫組較非控溫組及控溫組氧和指數(shù)改善，具有統(tǒng)計學(xué)差異（1h:402.49±38.61比316.15±19.94比324.

5、36±28.93;6h:349.72±98.20比263.22±57.10比284.30±13.68;12h:241.20±15.29比220.25±6.29比233.40±28.64）。2、病理損傷情況:非控溫組、控溫組及亞低溫組光鏡下觀察見明顯病理損傷變化，且較對照組病理半定量評分顯著下降，為急性肺損傷模型建立成功的金標準;同時段亞低溫組較非控溫組及控溫組評分下降，具有統(tǒng)計學(xué)差異（1h:6.04±0.74比8.17±0.59比7.9

6、6±0.65;6h:9.09±0.80比13.00±0.98比13.13±1.02;12h:10.79±1.42比13.38±1.08比13.42±0.68）。3、肺泡灌洗液中PAI-1表達:PAI-1蛋白表達(ng/L)于干預(yù)后1、6、12h明顯下降（1 h:121.36±4.62比196.64±16.03比197.74±9.42,6 h:230.53±10.76比300.41±9.75比294.06±16.60,12 h:270.4

7、8±13.20比328.41±15.12比319.40±10.24,均P＜0.01）;4、肺組織中TLR2 mRNA、MyD88 mRNA表達（2-△△Ct）:較非控溫組及控溫組，亞低溫組TLR2、MyD88的mRNA表達于干預(yù)后1、6和12 h明顯下降（TLR2 mRNA表達1h:2.18±0.26比3.07±0.42比3.04±0.39,6h:4.09±0.29比5、06±0.39比4.90±0.25,12h:6.02±0.43比7

8、.26±0.49比7.10±0.54; MyD88 mRNA表達1h:2.25±0.41比3.14±0.35比3.04±0.30,6h:5.67±0.55比7.20±0.55比7.01±0.76,12h:7.14±0.60比9.17±0.73比8.87±0.54，均P＜0.01)。5、肺組織中NF-κ B p65蛋白變化:較非控溫組及控溫組，亞低溫組NF-κ B p65蛋白表達（A值）于干預(yù)后6h、12 h明顯下降（6h:0.31±0.