攜帶人突變型alpha-突觸核蛋白(A53T)帕金森病轉基因小鼠運動功能及胃腸功能的評價研究.pdf

1、帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，在60歲以上的人群中患病率達到2％，隨著年齡的增加，其發(fā)病率逐年增長。PD的主要病理特征為中腦黑質(zhì)(substantia nigra，SN)多巴胺（dopamine，DA）能神經(jīng)元選擇性丟失，紋狀體DA含量減少，殘存的DA能神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)路易小體，其主要成分為聚集的alpha-突觸核蛋白。
　　Braak提出PD腦內(nèi)病理進展的六級分級學說在國

2、際上已被廣泛接受，他指出黑質(zhì)病變可能已經(jīng)是PD發(fā)生的中期或中晚期（第三或第四階段），故臨床上通過運動癥狀改變而診斷的PD病人已經(jīng)到達疾病的中晚期階段。研究表明，對于散發(fā)性PD病人，在出現(xiàn)運動癥狀之前，98.6%的病人會出現(xiàn)一些非運動癥狀，包括嗅覺障礙，便秘，睡眠障礙，心血管功能障礙等。PD的非運動系統(tǒng)癥狀越來越受到研究者的關注。其中，胃腸道功能障礙的發(fā)生率是PD非運動癥狀中最高的，可達80%以上，尤其是胃排空延遲，在PD病人中的發(fā)生率高

3、達70%-100%。
　　本實驗在攜帶人突變型alpha-突觸核蛋白（A53T）的PD轉基因動物模型上，觀察了疾病進展過程中，小鼠運動行為和胃腸功能的變化，以期評價胃腸功能和運動行為發(fā)生改變的時間，并為進一步闡明 PD中胃腸道功能障礙的中樞機制奠定基礎。本實驗在 PD轉基因小鼠上，在不同年齡階段，應用旋轉棒法檢測了運動協(xié)調(diào)能力的改變，免疫熒光技術觀察中腦 SN內(nèi) DA能神經(jīng)元數(shù)量的改變，應用胃排空和小腸推進等不同方法，測定小鼠胃腸

4、功能的變化。結果如下：
　　1. A53T PD轉基因小鼠基因型鑒定：A53T+/-與野生型小鼠雜交，后代陽性轉基因小鼠在248 bp處有明顯的條帶，與目的基因alpha-突觸核蛋白 cDNA片段的預期位置相符，證實人突變型 alpha-突觸核蛋白基因已整合到小鼠基因組，并可以穩(wěn)定傳代。
　　2.在A53T PD轉基因雌鼠中，23-24月齡組小鼠在旋轉棒上的停留時間降低了75%，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）

5、。而16-17月齡和19-20月齡組，A53T PD轉基因雌鼠在旋轉棒上停留時間未觀察到變化。
　　3.在A53T PD轉基因雄鼠中，19-20月齡組小鼠在旋轉棒上的停留時間降低了45%，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而12-13月齡和16-17月齡組，A53T PD轉基因雄鼠在旋轉棒上停留時間未觀察到明顯變化。
　　4.在A53T PD轉基因雌鼠中，17月齡和19月齡組小鼠的SN DA能神經(jīng)元數(shù)目分別減少

6、15.4%和20.1%，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而12月齡和15月齡組，A53T PD轉基因雌鼠SN DA能神經(jīng)元數(shù)目未觀察到明顯變化。
　　5.在A53T PD轉基因雄鼠中，15月齡、17月齡和24月齡組小鼠的SN DA能神經(jīng)元數(shù)目分別減少了18.9%，22.3%和38.0%，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。12月齡組A53T PD轉基因雄鼠SN DA能神經(jīng)元數(shù)目未觀察到明顯變化。

7、　　6.在A53T PD轉基因雌鼠中，17月齡組小鼠的胃排空率升高了50%，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05），19月齡組小鼠的胃排空率未觀察到明顯變化。15月齡組的A53T PD轉基因雌鼠的小腸推進率降低了24.8%，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。17月齡和19月齡組的A53T PD轉基因雌鼠的小腸推進率未觀察到明顯變化。
　　7.在A53T PD轉基因雄鼠中，15月齡組小鼠的胃排空率升高了45%，

8、與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05），17月齡組A53T PD轉基因雄鼠的胃排空率降低30%，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。15月齡和17月齡組的A53T PD轉基因雄鼠的小腸推進率未觀察到明顯變化。
　　上述結果表明，在這種攜帶人突變型alpha-突觸核蛋白（A53T）PD轉基因小鼠中，雄鼠的發(fā)病年齡要早于雌鼠，伴隨著SN DA能神經(jīng)元數(shù)目的降低，動物會出現(xiàn)運動協(xié)調(diào)能力的降低，而在運動癥狀出現(xiàn)之前，P