樹(shù)突狀細(xì)胞生長(zhǎng)激素受體的檢測(cè).pdf

1、研究背景:
　　惡性腫瘤是威脅全球人類健康的頭號(hào)殺手，傳統(tǒng)治療手段如手術(shù)、放療、化療雖有進(jìn)展，但癌癥患者的預(yù)后仍不能令人滿意，發(fā)展新的治療方式及策略迫在眉睫。過(guò)繼性免疫治療采集外周血、臍血或骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增及誘導(dǎo)，回輸或轉(zhuǎn)輸回患者，起到有效抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，達(dá)到預(yù)防、控制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的目的。近年來(lái)，對(duì)于腫瘤組織中樹(shù)突狀細(xì)胞的浸潤(rùn)程度與腫瘤轉(zhuǎn)移及臨床預(yù)后關(guān)系的報(bào)道日益增多。
　　目前樹(shù)突狀細(xì)胞（d

2、endritic cells，DCs）被認(rèn)為是專職抗原提呈細(xì)胞（antigen presenting cell，APC）中功能最強(qiáng)的，能夠高效的激活初始型T細(xì)胞，引起免疫耐受和免疫激活，在機(jī)體免疫系統(tǒng)中不可或缺。但是機(jī)體內(nèi)DC細(xì)胞群的存在很少，對(duì)于臨床治療與科研的需求不能達(dá)到滿意。伴隨著DC基礎(chǔ)性研究的深入進(jìn)展，對(duì)DC的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)也獲得了很大的進(jìn)步。對(duì)單核細(xì)胞應(yīng)用白細(xì)胞介素-4（ interleukin-4， IL-4）和粒細(xì)胞-

3、巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF）共同刺激獲取細(xì)胞群組，這一時(shí)期的DC處于未成熟狀態(tài)，而再加入CD40L、炎癥因子、IL-1等刺激信號(hào)后，就能誘導(dǎo)DC分化成熟，并且具有不同的功能表型。
　　生長(zhǎng)激素(growth hormone，GH)是一種大分子蛋白質(zhì)，能促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、新陳代謝等過(guò)程。由于細(xì)胞膜的濾過(guò)作用，GH往往不能直接穿

4、透作用于細(xì)胞。細(xì)胞膜表面存在有生長(zhǎng)激素受體(growth hormone receptor，GHR)，GH要發(fā)揮生物活性就要與其結(jié)合，形成小分子聚合物透過(guò)細(xì)胞膜，通過(guò)其他信號(hào)分子的刺激表達(dá)GH的生物活性，并極高效的形成酶聯(lián)催化效應(yīng)。
　　目的:
　　體外應(yīng)用 IL-4及 GM-CSF聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)人臍血來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞，并應(yīng)用熒光定量PCR、western-blot、免疫熒光及免疫組化檢測(cè)生長(zhǎng)激素受體的表達(dá)，并探討其臨床意義。<

5、br>　　方法:
　　嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作，將10組人臍帶血采用淋巴細(xì)胞分離液離心，獲得臍血單核細(xì)胞，應(yīng)用白細(xì)胞介素-4（IL-4）和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（Granulocyte macrophage colony stimulating factor GM-CSF）誘導(dǎo)刺激單核細(xì)胞，獲得樹(shù)突狀細(xì)胞。設(shè)計(jì)將提取淋巴細(xì)胞后，誘導(dǎo)表達(dá)前淋巴細(xì)胞為對(duì)照組，誘導(dǎo)表達(dá)后為樹(shù)突狀細(xì)胞組，進(jìn)行免疫熒光，免疫組化，熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印記法

6、檢測(cè)生長(zhǎng)激素受體表達(dá)量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　臍血單核細(xì)胞在終濃度為5ng/ml的IL-4及10ng/ml的GM-CSF誘導(dǎo)下分化為成熟DCs。鏡下觀察熒光免疫及免疫組化染色的DC，其細(xì)胞核染色加深，陽(yáng)性率高；DCGHR基因和內(nèi)參基因的qRT-PCR中mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為75.3和24.7（P＜0.05）；Western結(jié)果示：與誘導(dǎo)前相比，誘導(dǎo)后的GHR蛋白表達(dá)相對(duì)灰度值增高，分別為0.2047±0.02