老齡對(duì)膿毒癥引起的不同部位骨骼肌煙堿型乙酰膽堿受體異質(zhì)化的影響.pdf

1、目的：研究老齡對(duì)膿毒癥引起的不同部位骨骼肌煙堿型乙酰膽堿受體（nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）異質(zhì)化的影響；從不同部位骨骼肌煙堿型乙酰膽堿受體異質(zhì)化的改變探討其可能發(fā)生的機(jī)制。
　　方法：健康成年雄性和老年雄性SPF級(jí)Sprague–Dawley（SD）大鼠各20只。成年大鼠鼠齡5月，體重220~250 g；老年大鼠鼠齡20月，體重475~500 g。采用隨機(jī)數(shù)字表法，將成年大鼠隨機(jī)分

2、為2組（n=10）：假手術(shù)組（Sham組）、膿毒癥組（CLP組）；老年大鼠按上述分組方式同樣分成2組（n=10）。假手術(shù)組大鼠僅行開(kāi)腹盲腸探查，不予盲腸結(jié)扎。膿毒癥組大鼠通過(guò)盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（Cecal ligation and puncture， CLP）構(gòu)建膿毒癥模型。在建模（CLP）或假手術(shù)（Sham）的前24 h、后24 h分別取大鼠尾靜脈和腹主動(dòng)脈血，采用ELIS A法檢測(cè)血清中白細(xì)胞介素6（IL-6）和腫瘤壞死因子α（TNF-

3、α）水平；在建?；蚣偈中g(shù)后24 h觀察大鼠存活率；觀察建模后24 h各組大鼠水平活動(dòng)距離和直立次數(shù)。處死剩余存活大鼠，進(jìn)行標(biāo)本采集。取脛前肌和膈肌，采用免疫熒光法測(cè)定γ-nAC hR和α7-nAC hR在脛前肌和膈肌細(xì)胞膜上的表達(dá)和分布；通過(guò) western-blot測(cè)定不同部位肌肉中γ-nAChR、α7-nAChR和neuregulin-1三種蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：（1）細(xì)胞因子水平：建模前24 h，各組間大鼠IL-6和TNF

4、-α差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。建模后24 h與建模前比較，CLP組IL-6和TNF-α水平較Sham組明顯增加，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）各組大鼠水平活動(dòng)距離和直立次數(shù)的比較：在水平活動(dòng)距離比較中，與 S ham-Ad u lt組比較， S ham-Ag ed組、C LP-Ad ult組和CLP-Aged組活動(dòng)距離明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Sham組和CLP組組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)，Aged組

5、活動(dòng)距離均較Adult組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在直立次數(shù)比較中，與Sham-Adult組比較，S ham-A ged組和 C LP-Ad ult組直立次數(shù)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與Sham-Aged組比較，CLP-Adult組直立次數(shù)進(jìn)一步下降（P<0.05）。CLP-Aged組未測(cè)出。
　?。?）CLP組和Sham組γ-nAChR和α7-nAChR表達(dá)量：與Sham組比較，C LP組大鼠骨骼

6、肌γ-nAC hR和α7-nAC hR蛋白表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。γ-nAChR和α7-nAChR蛋白分布于骨骼肌細(xì)胞膜上。
　　（4）老年組和成年組γ-nAChR和α7-nAChR表達(dá)量：與正常成年組比較，正常老年組骨骼肌γ-nAC hR和α7-nAC hR蛋白表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與膿毒癥成年組比較，膿毒癥老年組骨骼肌γ-nAC hR和α7-nAC hR蛋白表達(dá)明顯增高，差異有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；膿毒癥老年組和成年組γ-nAChR和α7-nAChR表達(dá)量均較正常老年組和成年組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）脛前肌和膈肌γ-nAChR和α7-nAChR表達(dá)量：在膿毒癥狀態(tài)下的老年組與成年組中，與脛前肌比較，膈肌γ-nAC hR和α7-nAC hR蛋白表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）γ-nAChR和α7-nAChR在Sham組和CLP組中的表

8、達(dá)構(gòu)成比：在脛前肌的 Sham-Adult組中，α7-nAChR表達(dá)較γ-nAChR多，但S ham-A ged組γ-nAC hR的表達(dá)開(kāi)始增加。在膈肌的S ham-Ad ult組中，α7-nAC hR表達(dá)繼續(xù)減少而γ-nAC hR的表達(dá)繼續(xù)增加，S ham-A ged組趨勢(shì)更加明顯。但γ-nAC hR和α7-nAC hR的表達(dá)在各亞組中均維持在50％左右。在脛前肌的C LP-Ad ult組中，α7-nAC hR表達(dá)與γ-nAC hR接

9、近。在膈肌的C LP-Ad ult組中，α7-n AC hR表達(dá)增加而γ-nAC hR的表達(dá)相對(duì)減少，C LP-Aged組中γ-nAC hR表達(dá)略微增加，α7-nAC hR略微減少。同樣，γ-nAC hR和α7-nAC hR的表達(dá)在不同亞組中均維持在50%左右。
　?。?）neuregulin-1蛋白表達(dá)量：與Sham組的成年大鼠相比，Sham組老年大鼠脛前肌和膈肌中的neuregulin-1蛋白均減少（P<0.05）。同樣，CL

10、P老年組的neuregulin-1蛋白表達(dá)量較膿毒癥成年組減少（P<0.05），并且膈肌中neuregulin-1蛋白表達(dá)量較脛前肌減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）膿毒癥和老齡均可導(dǎo)致骨骼肌細(xì)胞膜上幼稚型乙酰膽堿受體（γ-nAC hR）和神經(jīng)型乙酰膽堿受體（α7-nAC hR）表達(dá)升高，并分布于骨骼肌整個(gè)細(xì)胞膜。
　?。?）老齡可加重膿毒癥導(dǎo)致的骨骼肌nAChR異質(zhì)化。
　?。?）膿毒癥條件下膈肌較脛前肌表現(xiàn)出