天津地區(qū)顱內(nèi)動脈瘤危險因素相關基因多態(tài)性的研究.pdf

1、目的：顱內(nèi)動脈瘤（Intracranial aneurysm，IA）破裂引起的自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage）是神經(jīng)外科危重急癥之一。關于IA危險因素的相關基因的研究很少有報道，本研究為探索糖尿病、高血壓等危險因素相關的SNP位點的等位基因頻率和基因型頻率在天津漢族顱內(nèi)動脈瘤患者與正常對照者中的分布情況；探討糖尿病、高血壓等危險因素相關基因多態(tài)性與顱內(nèi)動脈瘤患者之間的關聯(lián)性。
　　方法:

2、>　　1.研究對象
　　本研究總共376人作為研究對象，其中119個IA患者及257個對照人群，但是病例組有116個DNA提取和基因分型有效；對照組有效人數(shù)為251人。病例組為2013-2014年間天津醫(yī)科大學總醫(yī)院神經(jīng)外科病房收集的119名顱內(nèi)動脈瘤患者，顱內(nèi)動脈瘤均經(jīng)手術及數(shù)字減影血管成像和或CT血管成像確診為顱內(nèi)動脈瘤。對照組受試者為257名本院體檢科體檢的健康漢族人群，所有受試者均無顱內(nèi)動脈瘤病史。本研究的22個基因的28

3、個SNP位點均為GWAS分析中與高血壓、糖尿病等危險因素顯著關聯(lián)的位點（p﹤5×10–8）。
　　2.研究方法：記錄病房收治顱內(nèi)動脈瘤患者和對照組一般臨床資料，制表并輸入數(shù)據(jù)至Excel中。使用全血基因組DNA提取試劑盒（北京百泰克生物技術有限公司）逐步提取外周血白細胞中全基因組 DNA。得到的基因組 DNA在Nanodrop ND-2000紫外分光光度計上測量濃度，在NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫中下載本研究涉及的SNP位點的序列，

4、然后整理格式（采用 Assay Designer3．1， Sequenom引物設計軟件格式），設計引物，并用基因組DNA擴增相應片段。最后在生物公司中測序鑒定各個樣本SNP位點的基因型。
　　3.統(tǒng)計學分析：使用SPSS統(tǒng)計軟件的卡方檢驗程序進行等位基因頻率的統(tǒng)計，22個基因區(qū)域的28個SNP位點在病例組和對照組之間等位基因頻率差異比較用卡方檢驗。計量資料用（均數(shù)±標準差）表示，采用單因素分析對組間的均數(shù)進行比較。P<0.05認為

5、差異有統(tǒng)計學意義。對有差異的臨床危險因素采用多因素Logist回歸模型分析。評估各危險因素是否存在累積效應。
　　結果:
　　本研究組共收集119名顱內(nèi)動脈瘤的患者，其中男性49名（41.2％），女性70名（58.8%），平均年齡為53.34±11.42歲。單因素分析，兩組間在年齡、高血脂、吸煙、飲酒上無顯著性差異（P>0.05）,在性別、高血壓、糖尿病以及心臟疾病中兩組之間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），經(jīng) Logist

6、ic回歸分析得出高血壓存在累積效應（P=1.0×10-4;OR,2.500;95%CI,1.573-3.972）；119名患者中一共138個動脈瘤，單發(fā)顱內(nèi)動脈瘤的為103名患者，其中以位于頸內(nèi)動脈的動脈瘤最多為67個（48.6%），前循環(huán)次之34個（24.6%），形狀以囊性為主122個（88.4%）。其中動脈瘤破裂的患者為82人，未破裂的為37人，在破裂和未破裂組之間高血壓和年齡差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但是Logistic回

7、歸分析未見累積效應。對22個基因的28個SNP位點在病例和對照組間進行等位基因頻率統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，位于TSLC2A9基因的rs7660895（P=0.007,OR,1.541;95%CI,1.126-2.110）和TOX基因上的rs11777927位點（P=0.013,OR,1.511;95%CI,1.088-2.098）與顱內(nèi)動脈瘤相關。在 IA組其中12個人相互之間有血緣關系，相同家庭取一人加入分析，結果顯示 rs7660895(P

8、=0.001,OR,1.691;95%CI,1.226-2.332)位點和rs11777927(P=0.006,OR,1.587;95%CI,1.137-2.213)位點關聯(lián)性增強。為了探討TSLC2A9基因的rs7660895和TOX基因上的rs11777927位點在顱內(nèi)動脈破裂和為破裂組是否存在差異，我們在兩組間進行等位基因的統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)rs7660895(P=0.007, OR,2.196;95%CI,1.230-3.921)在兩