自閉癥大鼠海馬細胞凋亡相關蛋白的表達及電針“長強”穴的干預作用.pdf

1、目的:
　　1.觀察細胞凋亡相關蛋白bax、bcl-2在自閉癥大鼠海馬的表達。
　　2.觀察電針“長強”穴對自閉癥大鼠海馬bax、bcl-2蛋白表達的影響。
　　方法一:
　　健康成年Wistar雌雄大鼠1∶1合籠，第二日清晨，觀察大鼠托盤，若有陰栓，則記為胚胎第1天，孕雌鼠單獨飼養(yǎng)。孕鼠隨機分為兩組，一組在E12.5（孕12.5天）時腹腔注射VPA（丙戊酸鈉），產(chǎn)下的仔鼠為模型組;另一組正常待產(chǎn)，產(chǎn)下的仔鼠為空

2、白組。產(chǎn)下的仔鼠經(jīng)發(fā)育行為學測評，篩選出自閉癥大鼠，再予Morris水迷宮試驗測試其學習記憶能力。隨機取空白組和模型組大鼠各12只，相同環(huán)境下飼養(yǎng)20天，不予干預。療程結束第二日再予Morris水迷宮試驗測試，取腦組織，應用免疫組化和免疫印跡檢測技術觀察大鼠海馬bax、bcl-2蛋白的表達。
　　方法二:
　　造模及測評同方法一。取36只自閉癥大鼠隨機分為電針“長強”組（長強組）、電針非穴組（非穴組）、非針刺對照組（模型組）

3、各12只，另隨機選取空白組大鼠12只。長強組取長強穴，電針刺激(連續(xù)波，頻率為2Hz，強度為2mA)20min，連續(xù)治療20天為1個療程，共1個療程;非穴組取大鼠右脅肋下緣一橫指處，余操作同長強組;空白組和模型組在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，不予干預。療程結束第二日再予Morris水迷宮試驗測試，取腦組織，應用免疫組化和免疫印跡檢測技術觀察大鼠海馬bax、bcl-2蛋白的表達。
　　結果一:
　　1.睜眼試驗:與空白組相比，模型組睜眼遲

4、，PN12無差異，PN13、PN14、PN15、PN16有顯著性差異(P＜0.05）。
　　2.熱板致痛試驗:與空白組相比，模型組痛閾升高，PN9、PN11、PN13和PN15有顯著性差異(P＜0.05）。
　　3.Morris水迷宮:療程前:與空白組相比，模型組平均潛伏時間延長、穿越平臺次數(shù)減少，有顯著性差異(P＜0.05）。療程后:與空白組相比，模型組平均潛伏時間延長、穿越平臺次數(shù)減少，有顯著性差異(P＜0.05）。

5、r>　　4.免疫組化:與空白組相比，模型組bax蛋白的表達降低、bcl-2蛋白的表達升高，有顯著性差異（P＜0.05）。
　　5.免疫印跡:與空白組比，模型組bax蛋白的表達降低、bcl-2蛋白的表達升高，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　結果二:
　　1.睜眼試驗:同結果一中睜眼試驗。
　　2.熱板致痛試驗:同結果一中熱板致痛試驗。
　　3.Morris水迷宮:療程前:同結果一中療程前。療程后:與模型組

6、相比，空白組、長強組平均潛伏時間縮短、穿越平臺次數(shù)增加，有顯著性差異(P＜0.05)，非穴組平均潛伏時間縮短、穿越平臺次數(shù)增加，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4.免疫組化:與模型組相比，長強組bax蛋白的表達升高、bcl-2蛋白的表達降低，有顯著性差異(P＜0.05);非穴組bax蛋白的表達升高、bcl-2蛋白的表達降低，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　5.免疫印跡:與模型組相比，長強組bax蛋白的表達升高