Aurora A對子宮內(nèi)膜癌轉(zhuǎn)移能力及化療藥物抵抗性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　子宮內(nèi)膜癌(Endometrial Cancer，EMC)為女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及化療藥物不敏感與臨床不良預(yù)后密切相關(guān)。因此，對子宮內(nèi)膜癌侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥性的研究至關(guān)重要。
　　AuroraA屬于絲/蘇氨酸激酶家族成員，參與調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)展與有絲分裂。其基因擴(kuò)增及蛋白過表達(dá)常見于包括婦科腫瘤在內(nèi)的多種實體腫瘤，已成為腫瘤治療的新靶點，眾多AuroraA小分子抑制劑已進(jìn)入臨床試驗。既

2、往研究表明，子宮內(nèi)膜癌中異常增高的AuroraA可能與腫瘤的級別、病理類型等具有相關(guān)性;然而，其具體的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。
　　本研究通過臨床樣本調(diào)查、體外細(xì)胞功能實驗及體外分子機(jī)制研究三個方面明確AuroraA表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性;闡述AuroraA對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移能力及耐藥性的影響;并探究Aurora A通過AKT/MMP-2，MMP-9通路調(diào)控子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移能力及化療藥物抵抗性的分子機(jī)制，為評估該通路相關(guān)分子及其抑

3、制劑是否可以作為臨床診治的新靶點提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　1.通過qRT-PCR、Western Blot及免疫組化檢測子宮內(nèi)膜癌及正常內(nèi)膜組織中Aurora A的mRNA及蛋白水平;分析Aurora A的表達(dá)與患者臨床病理特征的相關(guān)性。
　　2.通過CCK-8、Migration Assay方法檢測外源性高表達(dá)或內(nèi)源性抑制AuroraA后2種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系（高分化子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa及中分化子宮內(nèi)

4、膜癌細(xì)胞系HEC-1B）的遷移能力及其對化療藥物紫杉醇、順鉑抵抗性的變化。
　　3.通過qRT-PCR、Western Blot、明膠酶譜及細(xì)胞功能逆轉(zhuǎn)實驗(AKT活性抑制劑wortmannin，MMP-2/9活性抑制劑SB-3CT)探究AKT/MMP-2，MMP-9信號通路在Aurora A介導(dǎo)的腫瘤進(jìn)展中的調(diào)控機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.在人子宮內(nèi)膜癌組織中，AuroraA蛋白水平顯著升高，其表達(dá)與患者臨床病理特征

5、具有相關(guān)性。
　　2.腺病毒外源性高表達(dá)Aurora A能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa與HEC-1B的遷移能力，并增加其對紫杉醇、順鉑的抵抗性;同時，Aurora A特異性抑制劑MLN8237能夠抑制Ishikawa與HEC-1B的遷移能力，并降低其藥物抵抗性。
　　3.Aurora A能夠促進(jìn)MMP-2，MMP-9 mRNA的表達(dá)，并增加MMP-2/TIMP-2及MMP-9/TIMP-1 mRNA表達(dá)比值;同時，

6、Aurora A能夠促進(jìn)MMP-2，MMP-9蛋白表達(dá)。
　　4.AuroraA通過磷酸化AKT(Ser473)(Thr308)位點調(diào)控MMP-2，MMP-9的表達(dá);AKT活性抑制劑wortmannin能夠有效逆轉(zhuǎn)AuroraA介導(dǎo)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移能力增加和化療藥物不敏感;MMP-2/9活性抑制劑SB-3CT能夠抑制Aurora A介導(dǎo)的化療藥物不敏感。
　　結(jié)論：
　　本研究證實絲/蘇氨酸激酶Aurora A在子