強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良1型的臨床特點(diǎn)和microRNA的差異表達(dá).pdf

1、目的:
　　1.分析和總結(jié)強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良1型(myotonic dystrophy type1，DM1)患者骨骼肌和多系統(tǒng)受累特點(diǎn)，提高對(duì)該病復(fù)雜臨床表現(xiàn)的認(rèn)識(shí)水平。
　　2.分析中國(guó)北方漢族人群正常DMPK等位基因CTG重復(fù)序列拷貝數(shù)的分布特點(diǎn)，豐富對(duì)中國(guó)漢族人DM1發(fā)病率的認(rèn)識(shí)。
　　3.驗(yàn)證在DM1中存在異常表達(dá)的miRNA，探索其在DM1發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:
　　1.選取2009年3月-

2、2015年12月在我院神經(jīng)內(nèi)科門診經(jīng)分子診斷確診為DM1的患者85例，回顧性分析其肌肉受累程度及多系統(tǒng)受累特點(diǎn)。
　　2.采用PCR片段長(zhǎng)度分析法對(duì)197名中國(guó)北方漢族人（62名DM1患者和135名健康體檢者）正常DMPK基因CTG重復(fù)片段多態(tài)性進(jìn)行分析，并將該分布特點(diǎn)與中國(guó)其他地區(qū)人群和其他種族人群進(jìn)行比較。
　　3.選取12例DM1患者的活檢股四頭肌標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)組，12例（年齡和性別匹配）骨科手術(shù)患者的正常股四頭肌標(biāo)本為對(duì)

3、照組，采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)兩組標(biāo)本間miR-196a、miR-182、miR-451、miR-200c, miR-146a, miR-133a、miR-1, miR-206,CELF1，MBNL1，CELF2和MYF5的相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證;
　　4.選擇熒光素酶實(shí)驗(yàn)對(duì)miR-196a和miR-182與CELF2的調(diào)控關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:
　　1.85例DM1患者（男52例，女33例）中47例有陽(yáng)性家族史;

4、首發(fā)癥狀以肢體無(wú)力最常見(jiàn)(60％)。肌強(qiáng)直、肌無(wú)力、肌萎縮的發(fā)生率分別為96.50％、92.90％、68.60％，主要以頭面諸肌、頸前肌、肢體遠(yuǎn)端肌受累明顯。69例完成了MIRS分級(jí)，1級(jí)2例、2級(jí)7例、3級(jí)24例、4級(jí)33例、5級(jí)3例，患者M(jìn)IRS分級(jí)和病程(r=0.352，P=0.003)及年齡（r=0.242，P=0.045）具有相關(guān)性。MIRS分級(jí)與起病年齡（r=0.036，P=0.771）之間無(wú)明顯相關(guān)性。MIRS分級(jí)≥4的患

5、者與≤3的患者病程中位數(shù)（四分位數(shù)間距）分別為10.0(2.3，18.8)年和4.0(2.0，10.0)，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.570，P=0.010);平均發(fā)病年齡分別為37.9±10.5歲和33.3±13.3歲，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-1.619，P=0.110）;73例完成了多系統(tǒng)受累的評(píng)估，其中60例存在多系統(tǒng)受累，病程中位數(shù)（四分位數(shù)間距）為7.0(2.3，11.0)年;13例不伴多系統(tǒng)受累，病程中位數(shù)（四

6、分位數(shù)間距）為4.0(2.0，13.5)年，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=1.456，P=0.029)。
　　2.62名DM1患者和135名無(wú)癥狀親屬中共檢出332個(gè)正常DMPK等位基因，所含CTG拷貝數(shù)從5到32不等。其中CTG拷貝數(shù)為5的頻率最高(24.40％)，其次為12拷貝(22.90％)，13拷貝(18.70％)，11拷貝(17.80％)和14拷貝(5.10％)，大等位基因（CTG≥19）的出現(xiàn)頻率為2.70％。

7、　　3.miR-196a、miR-182、miR-146a、miR-200c在DM1中低表達(dá);CELF2、MYF5在DM1中高表達(dá);miR-1、miR-133a、miR-206、miR-451、CELF1和MBNL1在DM1中未發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)。TargetScan提示CELF2可作為miR-182和miR-196a的靶基因，熒光素酶實(shí)驗(yàn)顯示miR-196a和miR-182可調(diào)控CELF2的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.典型的DM

8、1為青中年隱襲起病，陽(yáng)性家族史有助于診斷。肌強(qiáng)直以舌肌和大魚(yú)際最敏感，叩擊這兩個(gè)部位有助于不典型肌強(qiáng)直癥狀的檢出。患者病程越長(zhǎng)，MIRS分級(jí)越高，合并多系統(tǒng)損害的可能性越大。骨骼肌以外，白內(nèi)障發(fā)生率最高，對(duì)本病有一定的提示作用。
　　2.正常DMPK基因CTG序列在中國(guó)北方人群中的分布特點(diǎn)與南方人群略有不同，DM1的流行病學(xué)特征需要進(jìn)一步行多地區(qū)、多民族的大樣本研究加以明確。
　　3.miR-196a、miR-182可與CE