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文檔簡介
1、目的:構(gòu)建含Gab2基因CDS片段,F(xiàn)L片段以及FLM表達(dá)載體并探究Gab2基因是否具有non-coding功能。
方法:構(gòu)建CDS,F(xiàn)L和FLM基因表達(dá)載體,然后構(gòu)建瞬轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞系和結(jié)腸癌細(xì)胞系,通過western blot檢測瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞系中相關(guān)蛋白分子的表達(dá)情況,再通過各種細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)檢測,對(duì)比轉(zhuǎn)入三種質(zhì)粒載體后的細(xì)胞功能差異,以及用Q-PCR檢測下游基因表達(dá)情況的差異,從而作出Gab2基因CDS區(qū)域以及其真正全長FL的比
2、較,推測Gab2基因除了coding功能外是否還具有一定的non-coding功能。
結(jié)果:成功構(gòu)建出了Gab2基因的CDS,F(xiàn)L,F(xiàn)LM表達(dá)載體,并構(gòu)建了相應(yīng)的瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞用于功能實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)定量PCR檢測,在功能實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)以及Real-time PCR的檢測結(jié)果中都顯示著Gab2基因的CDS片段功能與其全長FL有一定的相似性,但也存在著很大的差異,甚至有很多相反的情況出現(xiàn)。
結(jié)論:Gab2基因的功能可能并不僅僅取決
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